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目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallaocatechin-3-gallate,EGCG)对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响,初步探讨其抑制肿瘤细胞增殖的分子机制。
方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞系细胞,采用MTT比色法检测EGCG对MGC-803细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析EGCG对MGC-803细胞周期分布的影响;使用免疫细胞化学、免疫印迹等方法观测EGCG对MGC-803细胞周期相关蛋白表达的影响。
结果:MTT比色结果显示EGCG能呈浓度依赖性抑制MGC-803细胞增殖,不同浓度EGCG(20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL)处理MGC-803细胞48h后,其细胞增殖抑制率分别为21.7%、32.8%、52.5%、61.3%、66.5%,与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。IC50=58.60μg/mL。
流式细胞术分析结果提示:EGCG诱导人胃癌MGC-803细胞G1期阻滞。随着处理时间的延长,诱导周期阻滞的效应越明显。相同时间处理组,不同浓度处理与空白对照相比均发生了G1期阻滞。其中长时间、较低剂量组(40μg/mL、60μg/mL,48h)周期阻滞效果较为显著。而短时间(24h)处理组中,各浓度之间诱导周期阻滞效应无显著差异。
免疫细胞化学图像定量分析显示:经EGCG(60μg/mL,48h)处理后,人胃癌MGC-803细胞中CyclinE、p53、c-Myc蛋白阳性率较未处理组显著降低(P<0.05),而p21WAF1蛋白表达增强(P<0.05)。
免疫印迹结果显示:EGCG能下调Erk1/2蛋白的磷酸化水平,其作用与浓度和作用时间相关。EGCG能下调Rb蛋白磷酸化水平,其调节作用与浓度有关。结论:1.EGCG对体外培养的人胃癌MGC-803细胞系细胞具有抑制增殖作用,呈浓度依赖性;2.EGCG抑制MGC-803细胞增殖作用与诱导细胞周期G1期阻滞有关;3.EGCG通过抑制Erk1/2磷酸化,下调CyclinE表达,抑制Rb蛋白磷酸化,诱导MGC-803细胞G1期阻滞。