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目的:
研究中药蛇床子有效成分蛇床子素(简称Ost)的雄激素样作用及其作用机制。
方法:
1.蛇床子素用95%乙醇提取、石油醚分离、无水乙醇纯化后,再进行理化性质、薄层层析法和红外吸收光谱法鉴定。
2.将雄性大鼠处死,取睾丸间质细胞加药进行体外培养,用放射免疫分析方法测定睾酮含量。
3.建立雄性小鼠悬吊应激性性功能低下模型,连续灌胃蛇床子素20d后,观察蛇床子素对应激性性功能低下的保护作用;测定血清睾酮和皮质酮水平;计算性器官及附性器官脏器系数。
4.建立环磷酰胺致生殖系统损伤雄性小鼠模型,连续灌胃蛇床子素20d后,测定血清睾酮水平;计算性器官及附性器官脏器系数;观察睾丸和附睾的形态学改变;采用免疫组化法测定睾丸中雄激素受体含量。
5.建立氢化可的松致肾阳虚雄性小鼠模型,观察蛇床子素对肾上腺、免疫器官、性器官及附性器官重量的影响;对动物体重、体温、自主活动和游泳时间的影响。
6.采用幼年去势雄性大鼠连续灌胃蛇床子素20d后测定大鼠血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量;计算附性器官脏器系数。
7.急性毒性测定。
结果:
1.从蛇床子中提取得的结晶经理化性质、薄层层析法和红外吸收光谱法鉴定为蛇床子素。
2.小剂量人绒毛膜促性腺激素(hCG)即可使睾酮分泌达峰值,加大剂量则会抑制细胞分泌睾酮的功能;蛇床子素对睾酮基础分泌的影响与剂量有关,高浓度有一定的抑制作用,低浓度则有一定的促进作用,但与对照组比较均无显著性差异;对促性腺激素(hCG)刺激的睾酮分泌,蛇床子素高浓度(10-4mol/L)组有显著的抑制作用(P<0.01)。
3.悬吊应激模型组小鼠性行为明显减少,同时血清睾酮水平明显降低。蛇床子素各剂量组对应激引起的性行为低下及血清睾酮水平下降均有明显的对抗作用,并能增加睾丸、附睾、精液囊和包皮腺的脏器系数。
4.蛇床子素高剂量组可显著升高环磷酰胺致生殖系统损伤雄性小鼠血清中睾酮的含量和附睾的脏器系数;给药组均可增加精液囊的脏器系数,改善睾丸生精功能;免疫组化结果显示,睾丸特异性雄激素受体(AR)免疫染色见于睾丸间质细胞、肌样细胞和精原细胞。蛇床子素可增加睾丸肌样细胞雄激素受体(AR)阳性细胞百分率。
5.蛇床子素高剂量可显著增加氢化可的松致肾阳虚雄性小鼠肾上腺、胸腺、睾九、附睾和精液囊的脏器系数;增加肾阳虚小鼠的体重,延长游泳时间。
6.蛇床子素高剂量组可明显升高幼年去势雄性大鼠血清T、LH和FSH含量;给药组均可显著增加精液囊、前列腺的脏器系数。
7.灌胃给药,蛇床子素的半数致死量(LD50)为3.60±0.40g。
结论:
蛇床子素具雄激素样和促性腺激素样作用,其机制可能是通过调节下丘脑-垂体-睾丸轴,促进生殖内分泌功能。