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近些年因疾病爆发、生境破坏等诸多因素、特别是环境中病原微生物的影响,导致全球两栖类种群数量呈锐减趋势,已引起了人们广泛关注。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为机体识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),在微生物侵袭时,使机体启动固有免疫应答,从而激活一系列信号级联反应引发针对病原体的特异性免疫应答。本研究以中国东北地区优势两栖动物东北林蛙(R.dybowskii)为研究对象,以蛙类易感病原微生物嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)为感染源,研究在嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙体内TLR4信号通路中核转录因子IRF3和IRF7的调控机制。 本研究通过HE染色观察Ah感染东北林蛙后其肝脏组织病理学变化,采用高通量测序获得东北林蛙IRF3和IRF7序列设计引物,荧光定量PCR检测在Ah胁迫下其肝、心、肾、脾组织中TLR4信号通路中IRF3和IRF7mRNA表达变化,为探明东北林蛙被细菌感染后其体内TLR4通路的作用机制奠定基础。 实验结果显示:Ah感染后肝脏组织病理学观察所见,随着时间延长(12~72h),肝细胞变性,呈空泡样变,细胞间隙增大,炎性细胞浸润逐渐明显。荧光定量PCR结果显示:东北林蛙TLR4信号通路中IRF3mRNA在肝、心、肾、脾组织中均呈上调表达,在12h达峰值;IRF7mRNA在肝、心、肾、脾组织均呈上调表达,且在肾、心中于12h达峰值,在脾、肝脏中则分别在24h和72h达到峰值。此外,IRF3mRNA在肾脏和脾脏中上调表达峰值明显高于心脏和肝脏,其中尤以脾脏变化最为明显,为对照组的13.7倍(p<0.01);IRF7mRNA表达量在脾脏中变化最明显,为对照组的13倍(p<0.01),其次在肾脏中表达量为对照组的9倍(p<0.01),在肝脏中表达量最低,为对照组的1.3倍。 本研究结果表明,嗜水气单胞菌对东北林蛙具有致病性,IRF3、IRF7参与了TLR4信号通路的固有免疫应答。