论文部分内容阅读
针对目前水产品中氯霉素检测限量极低以及发光细菌对环境污染高度敏感的特点,本文以建立快速、敏感、低成本的氯霉素检测方法为最终目标,以筛选具有发光性能稳定、发光强度高、易于培养、并对氯霉素高度敏感的海洋发光细菌为出发点,研究了发光细菌的生长发光性能,建立了利用发光细菌进行水产品中氯霉素痕量检测的方法,并对氯霉素作用发光细菌机制做了初步的研究。第一:从青岛近海分离的多株发光细菌中筛选出一株对氯霉素敏感的鳆发光杆菌Photobacterium leiognathi YL。该菌株发光稳定,持续发光时间较长,易于培养。该菌株在26℃液体培养48h,发光强度保持在3.0×106以上18h左右。对其进行发光条件的优化,最适发光的培养条件为:温度25-30℃,摇瓶转速为150r/m,初始pH为7.5,最适NaCl浓度为3-5%;最适甘油浓度为0.4%。对P.leiognathi YL的趋化性质进行研究,发现该菌株对氯霉素高度敏感,适合作为检测氯霉素的工具菌株。第二:构建鳆发光杆菌P.leiognathi YL检测水产品中氯霉素残留的方法体系:接种单菌落快速培养,制备出适宜检测的菌悬液,在细菌培养液中添加不同浓度的氯霉素溶液,研究氯霉素浓度与细菌发光强度抑制率之间的关系。通过控制菌体起始发光强度,菌液与氯霉素作用时间,菌液与氯霉素体积比等建立发光细菌检测水产品中氯霉素体系。结果表明,菌体的起始发光强度控制在3.0×105;菌液与氯霉素的最佳作用时间为30min,菌液与氯霉素的最佳体积配比为1:1,氯霉素浓度与细菌发光强度抑制率呈良好的线性关系。该方法的线性范围为0.1 ng/mL-1.0 ng/mL,相关系数R2为0.989,该体系对氯霉素的检测灵敏度可以达到0.1ng/mL,可以作为水产品中痕量氯霉素残留的一种快速、灵敏的检测方法。用于水产品的氯霉素加标回收试验,鱼肉中添加浓度为0.1 ng/g -1.0 ng/g时,回收率在40.34%-114.26%之间。第三:为了更深入研究发光细菌检测法,本文对氯霉素作用发光细菌机制进行了初步探讨。实验结果表明:低剂量氯霉素(1 ng/mL以下)在短效作用时间(30min)内影响的P.leiognathi YL的发光强度而不是其生长。