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目的: 气道重塑在哮喘的发生和发展中起关键作用，其复杂的发生机制是国内外研究的热门。ORMDL3作为新近发现的与儿童哮喘紧密相关的基因，在哮喘气道重塑中的作用机制尚不明确。而ERK1/2信号传导因子、MMP-9表达是否参与ORMDL3调节哮喘气道重塑有待研究。本研究借助哮喘小鼠模型开展研究，旨在探讨ORMDL3基因与哮喘气道重塑的相关性、调节机制，以及BUD对气道重塑的干预机制。 研究目的具体如下: 明确ORMDL3在哮喘早期气道重塑中的作用机制; 验证ORMDL3对哮喘ERK1/2信号转导和MMP-9活化、表达的调控作用; 研究哮嵩小鼠模型BUD对气道重塑的干预机制。 方法: 1 以清洁级别的BALB/C小鼠（6周龄，雌性，28只）为研究对象，将实验动物随机分成3组:哮喘模型组（模型组，10只）、正常对照组（正常组，8只）和BUD干预组（BUD组，10只）。实验准备阶段，适应饲养7d，以减少小鼠应激。BUD组和模型组在实验阶段的第0、7、14d用卵清白蛋白(OVA，100μg)和氢氧化铝(4mg)混悬液进行腹腔给药，使其产生致敏，正常组注射等剂量的PBS缓冲液。在28d后每周用OVA雾化激发三次，30min/次，BUD组小鼠（21d开始）在OVA激发前30min雾化吸入BUD悬浊液，正常组采用等剂量的PBS缓冲液雾化激发（腹腔注射3周，雾化吸入6周，共9周）。 2 9周后，处死小鼠，HE染色观察正常组、模型组、BUD组的气道壁厚度变化情况。 3 Masson染色观察正常组、模型组、BUD组小鼠的气道胶原沉积情况。 4 通过免疫组化，测定正常组、模型组、BUD组小鼠肺组织ORMDL3、MMP-9、P-ERK1/2的表达情况。 5 RT-PCR测定正常组、模型组、BUD组小鼠肺组织ORMDL3、MMP-9mRNA表达量。 6 蛋白免疫印迹法测定正常组、模型组、BUD组小鼠肺组织ORMDL3、MMP-9、ERK1/2、P-ERK1/2的表达情况。 7 统计学分析。 结果: 1 小鼠肺组织气道重塑情况 1.1 HE染色: 支气管气道壁的增厚，模型组明显高于正常组（19.9±0.4μm verus12.1±0.2μm;P＜0.01），但是BUD组相对于模型组明显降低（15.1±0.3μm verus19.9±0.4μm;P＜0.01）。然而BUD组并没有完全消除气道壁的增厚,经BUD治疗后炎细胞浸润和气道结构的损伤均有所减轻（15.1±0.3μm verus12.1±0.2μm;P＜0.05，P=0.011）。 1.2 Masson染色: BUD组与模型组相比，小鼠支气管气道壁增厚、平滑肌细胞增生和胶原沉积程度较模型组均明显减轻。 2 免疫组化测定小鼠肺组织中ORMDL3、p-ERK1/2及MMP-9的表达情况 2.1 免疫组化染色显示ORMDL3主要表达于支气管上皮细胞和炎细胞（淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等）细胞核及胞浆内，各组小鼠肺组织的炎细胞和支气管上皮细胞中ORMDL3的表达水平如下: 正常组中ORMDL3阳性表达细胞所占百分比:26.08％±12.18％; 模型组中ORMDL3阳性表达细胞的比例比正常组高且差异显著，具有统计学意义（67.98％±9.85％verus26.08％±12.18％,P＜0.05,P=0.026）; 2.2 免疫组化染色显示MMP-9主要表达于支气管上皮细胞和炎细胞（淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等）细胞核及胞浆内，各组小鼠肺组织的炎细胞和支气管上皮细胞中MMP-9的表达水平如下: 正常组中MMP-9阳性表达细胞所占百分比:20.28％±7.33％; 模型组中MMP-9阳性表达细胞的比例比正常组显著增高，差异具有统计学意义（85.00％±13.57％verus20.28％±7.33％,P＜0.01）; BUD组与模型组比较，MMP-9表达细胞显著降低（64.07％±9.53％verus85.00％±13.57％，P＜0.05，P=0.013），但仍比正常组高，差异极其显著，经分析，具有统计学意义（64.07％±9.53％verus20.28％±7.33％，P＜0.01）。 2.3 免疫组化染色显示P-ERK1/2主要表达于支气管上皮细胞和炎细胞（淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等）细胞核及胞浆内，各组小鼠肺组织的炎细胞和支气管上皮细胞中P-ERK1/2的表达情况如下: 正常组P-ERK1/2的阳性表达细胞所占百分比:31.04％±9.39％; 模型组的P-ERK1/2阳性表达细胞含量显著多于正常组，差异具有统计学意义(66.79％±15.7％verus31.04％±9.39％,P＜0.01); BUD组与模型组比较，p-ERK1/2表达细胞显著降低（52.38％±10.42％verus66.79％±15.7％，P＜0.05，P=0.015）仍高于正常组，差异有统计学意义(52.38％±10.42％verus31.04％±9.39％,P＜0.01)。 2.4 相关性分析: 模型组、BUD组中小鼠肺组织支气管上皮细胞的ORMDL3与p-ERK1/2、MMP-9的表达水平均呈现正相关关系，p-ERK1/2与MMP-9的表达水平也呈现正相关关系。 3 RT-PCR测定小鼠的肺组织中ORMDL3、MMP-9mRNA的表达水平 3.1 RT-PCR检测ORMDL3mRNA的表达: 正常组表达为:0.81±0.51（Ct值）; 模型组与正常组比较，模型组ORMDL3表达升高，差异极显著，经分析具有统计学意义（6.82±0.99verus0.81±0.51，P＜0.01）; BUD组小鼠的ORMDL3表达水平较模型组相比较明显下调，差异极显著，经分析具有统计学意义（4.11±1.05verus6.82±0.99，P＜0.01），但仍然显著高于正常组，差异有统计学意义（4.11±1.05verus0.81±0.51,P＜0.01）。 3.2 RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达: 正常组表达为:1.09±0.49; 模型组与之比较，其MMP-9的含量显著上升，差异显著，经分析具有统计学意义（4.10±0.88verus1.09±0.49，P＜0.01）; BUD组小鼠的MMP-9表达水平较模型组相比较明显下调，差异极显著，经分析具有统计学意义（2.12±0.89verus4.10±0.88,P＜0.01）,但仍然高于()组（2.12±0.89verus1.09±0.49,P=0.011,P＜0.05 4 蛋白免疫印迹法测定小鼠的肺组织中ORMD()MMP-9蛋白的表达水平 4.1 蛋白免疫印迹法检测ORMDL3的表达: 正常组表达为:1587±294（灰度值）; 模型组ORMDL3的表达水平升高（8924±629），较正常组相比较，差异极为显著，经分析具有统计学意义（P＜0.01）; BUD组ORMDL3的表达水平（3723±406）较模型组明显下调，差异极为显著，经分析具有统计学意义(P＜0.01)，但仍然明显高于正常组(P＜0.01)。 4.2 蛋白免疫印迹法检测MMP-9的表达: 正常组表达为:1137±395; 模型组MMP-9表达显著升高（13049±720，P＜0.01）; BUD组MMP-9的表达水平(2208±805)较模型组明显下调，差异极为显著，经分析具有统计学意义(P＜0.01)，但仍然明显地高于正常组（P＜0.01）。 4.3 蛋白免疫印迹法检测p-ERK1/2的表达: 正常组表达为:（502±220）; 模型组p-ERK1/2的表达（4976±340）较正常组显著升高（P＜0.01）; BUD组p-ERK1/2的表达水平（3795±336）较模型组明显下调，差异极为显著，经分析具有统计学意义(P＜0.01)，但仍然明显地高于正常组(P＜0.01)。 4.4 蛋白免疫印迹法检测ERK1/2的表达: 正常组（11594±550）、模型组（34583±596）和BUD组（27295±784）之间ERK1/2蛋白表达水平无明显差别，无统计学意义（P□0.05）。 4.5 相关性分析: 4.5.1 小鼠肺组织ORMDL3与p-ERK1/2、MMP-9的蛋白表达水平均呈现正相关关系，p-ERK1/2与MMP-9蛋白的含量表达也显现出正相关关系。 4.5.2 小鼠肺组织ORMDL3、p-ERK1/2及MMP-9蛋白表达水平与气道壁厚度呈现正相关关系。 结论: 1.ORMDL3通过调控ERK1/2/MMP-9信号传导途径促进支气管哮喘的气道重塑。 2.BUD试剂通过下调ORMDL3的表达水平，抑制ERK/MMP-9通路，从而缓解支气管哮喘气道重塑的进程。