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心肌梗死(myocardailinfarction，MI)是冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者严重的心脏事件，其后的心室重构可导致心力衰竭、心跳骤停、恶性室性心律失常甚至心源性猝死，严重威胁人类健康。如何有效防治MI后心室重构一直是心血管基础与临床研究的重点和热点。近年来，血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂和β受体阻滞剂等多种药物应用于临床，取得了一定的疗效，但仍无法阻止心室重构的发生。这说明影响MI后心室重构的因素还有很多。国外学者初步研究发现，粘结蛋白聚糖-1(Syndedan-1，Sdc1)在心肌损伤修复过程中作为炎症和基质重构的中心调节因子出现，在病理性心室重构中起负性调节作用，但具体机制尚不明确。作为防治心室重构的新靶点，明确Sdc1在MI后体内表达的特点，并探讨其作用和机制具有十分重要的意义。
本研究：①以MI大鼠为模型，分时段定量观察Sdc1在MI大鼠体内表达的时间分布特点；②构建携带大鼠Sdc1cDNA的重组腺病毒载体Ad—CMV—GFP—Sdc1；③在体转染Ad—CMV—GFP—Sdc1，使Sdc1在MI大鼠体内过表达，观察其对胶原合成、心室重构和心脏功能的影响，并初步探讨其可能的作用机制，旨在为MI后心室重构的防治提供新的思路和实验依据。
第一章Sdc1在MI大鼠体内表达的时间分布特点
1.1目的:建立MI大鼠模型，定量观察Sdc1在MI大鼠体内表达的时间分布特点。
1.2方法:
1.2.1分组：SD大鼠44只，结扎前降支建立MI大鼠模型。术后24h存活大鼠随机分为MI1天组(MI1d组)、MI3天组(MI3d组)、MI7天组(MI7d组)和MI14天组(MI14d组)。另设假手术组。每组n=6。
1.2.2方法：观察结束时处死大鼠，检测以下指标：
1.2.2.1MI大鼠模型的建立与评估指标：①MI面积(HE染色)；②梗死边缘区胶原沉积情况(Masson染色)；③心脏功能(超声心动图和血流动力学检查)；④心脏重量。
1.2.2.2Sdc1在MI大鼠体内表达的时间分布特点指标：检测不同时间段梗死边缘区Sdc1mRNA(RealtimePCR)、蛋白(Westernblot)和血清中可溶性Sdc1(ELISA法)表达水平。
1.3结果:
1.3.1MI大鼠模型的建立与评估：各组大鼠MI面积无差异(P>0.05)。假手术组大鼠心肌胶原纤维少，心脏各室壁厚度正常，运动协调。MI14d组大鼠梗死边缘区胶原纤维增加，左室前壁变薄，室壁运动减弱或消失，心脏功能下降(P<0.01)，心室重量增加(P<0.01)。
1.3.2Sdc1在MI大鼠体内表达的时间分布特点：假手术组大鼠心肌Sdc1mRNA和蛋白表达量低，血清中可溶性Sdc1水平低。MI术后大鼠梗死边缘区Sdc1mRNA和蛋白表达逐渐增加，血清中可溶性Sdc1水平逐渐升高，三者均在第3天达到高峰，此后逐渐下降，各组比较差别有统计学意义(P<0.01)。
1.3.3Pearson相关分析显示：MI大鼠血清中可溶性Sdc1水平与梗死边缘区心肌组织Sdc1蛋白表达水平呈正相关(r=0.952，n=30，t=16.533，P<0.01)。
1.4小结:
1.4.1采用结扎前降支法成功建立MI大鼠模型，模型的可重复性和均一性良好。
1.4.2基础状态下，大鼠心肌可检测到Sdc1mRNA和蛋白表达，血清中存在可溶性Sdc1，三者表达水平均较低。MI大鼠梗死边缘区Sdc1mRNA和蛋白表达明显增加，血清中可溶性Sdc1水平显著升高，三者均在第3天达到高峰，此后逐渐下降，呈现动态变化。
1.4.3MI大鼠血清中可溶性Sdc1水平与梗死边缘区心肌组织Sdc1蛋白表达水平呈正相关。
第二章重组腺病毒载体Ad—CMV—GFP—Sdc1的构建
2.1目的:构建携带大鼠Sdc1cDNA的重组腺病毒载体Ad—CMV—GFP—Sdc1。
2.2方法:
采用基因重组技术和改良的体外连接法构建重组腺病毒载体Ad—CMV—GFP—Sdc1；在293细胞中扩增，CsCl梯度离心纯化，以基因测序、酶切及PCR法进行鉴定，用TCID50法测定病毒的生物活性。
2.3结果:
基因测序显示质粒pCMV—Sport6.1-Sdc1正确携带大鼠Sdc1基因。酶切结果显示成功构建出重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒。PCR证实重组腺病毒携带Sdc1基因片段，提示Ad—CMV—GFP—Sdc1构建成功。TCID50法测得重组腺病毒生物活性为2×1011PFU/mL。
2.4小结:
采用基因重组技术和改良的体外连接法成功构建出携带大鼠Sdc1基因的重组腺病毒载体Ad—CMV—GFP—Sdc1，经扩增和纯化，获得重组腺病毒生物活性为2×1011PFU/mL。
第三章Sdc1过表达对MI大鼠心室重构的影响及机制探讨
3.1目的:在体转染Ad—CMV—GFP—Sdc1，观察Sdc1过表达对MI大鼠心室重构和心脏功能的影响并探讨其可能的作用机制。
3.2方法:
3.2.1分组：SD大鼠48只，结扎前降支术后即刻，在梗死边缘区行心肌内注射。根据注射内容物的不同分组：①MIAd—CMV—GFP—Sdc1转染组(n=8，注射Ad—CMV—GFP—Sdc1)；②MIAd—GFP对照组(n=8，注射Ad—GFP)；③MI盐水组(n=8，注射生理盐水)；④假手术组(n=6)。
3.2.2方法：重组腺病毒转染术后14天处死大鼠，检测以下指标：
3.2.2.1重组腺病毒转染与鉴定的指标：①注射点腺病毒的表达(观察绿色荧光)；②梗死边缘区Sdc1mRNA(RealtimePCR)、蛋白(Westernblot)和血清中可溶性Sdc1(ELISA法)表达水平。
3.2.2.2Sdc1过表达对MI大鼠心室重构影响的指标：①Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达比例(天狼星红染色)和排列情况(透射电镜)；②Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA水平(RealtimePCR法)；③MI面积、CVF、羟脯氨酸含量、胶原含量和心脏重量。
3.2.2.3Sdc1过表达对MI大鼠心脏功能影响的指标：超声心动图和血流动力学检查。
3.2.2.4Sdc1作用机制探讨的指标：①对炎症的影响(HE染色)；②对心肌细胞凋亡的影响(TUNEL法)；③p38MAPKmRNA(RealtimePCR)和蛋白(Westernblot法)表达水平。
3.4小结:
3.4.1采用心肌内注射法成功在体转染重组腺病毒，使Sdc1在转染后的MI大鼠体内过表达。
3.4.2MI大鼠心室重量和胶原含量增加，心功能下降，存在心室重构。Sdc1过表达能减轻心室重量，减少胶原合成，改善心室重构和心脏功能，提示Sdc1可能在MI后心室重构中具有重要作用。
3.4.3MI大鼠梗死边缘区有大量炎症细胞浸润，心肌细胞大量凋亡；Sdc1过表达能减少炎症细胞和凋亡细胞，提示Sdc1可能通过影响炎症反应和心肌细胞凋亡参与MI后心室重构。
3.4.4MI大鼠梗死边缘区p38MAPK信号传导通路明显活化，Sdc1过表达能抑制p38MAPK信号传导通路活性，提示Sdc1可能通过p38MAPK信号传导通路起作用，但具体机制有待进一步研究。
全文结论
4.1MI大鼠梗死边缘区Sdc1mRNA和蛋白表达增加，血清中可溶性Sdc1水平升高，三者均在第3天达到高峰，此后逐渐下降，呈现动态变化。MI大鼠血清中可溶性Sdc1水平与梗死边缘区心肌组织Sdc1蛋白表达水平呈正相关。
4.2采用基因重组技术和改良的体外连接法，成功构建出携带大鼠Sdc1基因的重组腺病毒载体。
4.3采用心肌内注射法成功在体转染重组腺病毒，使Sdc1在转染后的MI大鼠体内过表达。
4.4Sdc1过表达能抑制MI大鼠梗死边缘区胶原合成，改善心室重构和心脏功能，提示Sdc1可能在MI后心室重构中具有重要作用。
4.5Sdc1过表达能抑制MI大鼠梗死边缘区炎症反应和细胞凋亡，提示Sdc1可能通过影响炎症反应和细胞凋亡参与MI后心室重构。
4.6Sdc1过表达能抑制MI大鼠梗死边缘区p38MAPK信号传导通路的活性，提示Sdc1可能通过p38MAPK信号传导通路起作用，但具体机制有待进一步研究。