【摘 要】
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马传染性贫血病病毒(Equine Infectious Anemia Virus, EIAV)与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)同属反转录病毒科曼病毒属的成员,二者具有很多相似的特性,如遗传变异性、抗原性、细
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马传染性贫血病病毒(Equine Infectious Anemia Virus, EIAV)与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)同属反转录病毒科曼病毒属的成员,二者具有很多相似的特性,如遗传变异性、抗原性、细胞嗜性等.中国的EIAV弱毒疫苗是世界上唯一成功的慢病毒弱毒疫苗,应用此疫苗有效地控制了EIAV在中国的流行.因此,用EIAV疫苗株作为人艾滋病的动物模型,深入研究该弱毒株的复制和减毒机理具有极其重要的价值.该研究从EIAV弱毒株感染的驴胎皮肤细胞中提取前病毒DNA,根据张宝山等测定的驴白细胞弱毒株序列设计三对引物,分别扩增约2.8kb、2.4kb、4.0kb.这三个片段覆盖全部前病毒DNA.以感染EIAV弱毒的FDD细胞DNA为模板,通过PCR方法扩增出EIAV约2.8kb、2.4kb、4.0kb.分别将其克隆到载体质粒pBluescriptSK中,通过酶切分析,鉴定和序列测定获得三个含有2.8kb、2.8kb、4.0kb的重组质粒p2.8、p2.4、p4.0.将上述三个重组质粒中的外源片段亚克隆到一种质粒中,最终得到EIAV驴白细胞弱毒株前病毒DNA全基因克隆,命名为pV8266.对重组质粒pV8266进行序列分析发现,pV8266全长共8266个碱基(nt),其中U3a区为214nt,R区为81nt,U5区为39nt,gag基因长1200nt,pol基因长2589nt,env基因长2454nt.经序列比较发现,pV8266与D-A EIAV、克隆pV19相比,gag基因差异率分别为19﹪、36.3﹪;pol基因差异率分别为25.2﹪、32.2﹪;gp90差异率分别为11.7﹪、31.3﹪;gp45差异率分别为6.6﹪、29.3﹪;U3区差异率分别为12.2﹪、25.5﹪.还发现,pV2866的gag、pol基因无重叠区,pol基因明显截短,env基因gp90和gp45之间出现一个终止密码子.该研究结果为进一步研究中国EIAV弱毒株的复制机制和减毒机理奠定了基础.
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