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胃癌为高度侵袭性恶性消化道肿瘤,由于早期症状不明显,导致患者就诊时已经处于进展期胃癌。虽然现代诊疗技术的进步及微创技术的不断发展,但手术切除仍是治疗胃癌的主要手段。随着“精准医疗”的提出和具体药物的出现,靶向药物逐渐被应用于临床治疗之中。研究表明,心房钠尿肽（Atrial natriuretic peptide,ANP）对多种肿瘤的侵袭和转移具有抑制作用,但在胃癌中尚未被证实。有研究显示,ANP有抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。因此推测,ANP可以通过调节信号通路的激活水平,抑制侵袭转移相关分子的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。各种信号通路形成网络共同调节肿瘤的发生发展,Hedgehog信号通路通过与多种信号通路相互作用,影响侵袭、转移相关分子的表达,多种肿瘤的侵袭转移。组织学研究表明,Hedgehog信号通路对胃癌的侵袭和转移存在影响,故而推测ANP通过调节Hedgehog信号通路来影响胃癌细胞侵袭转移相关因子的表达水平来影响其侵袭和转移。第一部分ANP对胃癌细胞MGC-803侵袭转移的影响目的:探讨ANP对MGC-803细胞侵袭和转移的影响及其可能机制,为胃癌的靶向药物治疗提供新思路和理论依据。方法:1.使用不同浓度的ANP(10-66 mol/L、10-77 mol/L、10-88 mol/L、10-9mol/L、10-1010 mol/L)分别处理细胞,MTT法检测ANP对MGC-803细胞增殖能力的影响,选择10-66 mol/L ANP作为后续实验的药物作用浓度。2.Transwell实验检测ANP对MGC-803侵袭和转移的影响。3.qRT-PCR、Western Blot检测ANP作用于MGC-803细胞后,MMP9mRNA及蛋白的表达量变化。结果:1.应用ANP处理MGC-803细胞后,Transwell实验显示,穿越小室的细胞数目较对照组减少,细胞侵袭和转移能力下降。2.应用ANP处理MGC-803细胞后,MMP9 mRNA及蛋白的表达水平均显著下降。结论:ANP能够通过抑制MMP9的表达水平来抑制胃癌细胞MGC-803细胞的侵袭和转移。第二部分ANP对胃癌细胞MGC-803侵袭转移的影响与Hedgehog信号通路之间的关系目的:探讨ANP对胃癌细胞MGC-803的侵袭转移与Hedgehog信号通路之间的关系。方法:1.应用Western Blot方法检测Hedgehog信号通路关键组件分子Smo、Gli1蛋白在胃癌细胞系MGC-803中的表达水平。2.使用不同浓度的Cyclopamine（30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L）分别处理细胞,MTT法检测Cyclopamine对MGC-803细胞增殖能力的影响,选择40μmol/L Cyclopamine作为后续实验的药物作用浓度。3.Transwell检测Cyclopamine对胃癌细胞MGC-803细胞侵袭转移的影响。4.qRT-PCR及Western Blot检测单独应用Cyclopamine、同时应用Cyclopamine及ANP,作用于胃癌细胞MGC-803,Smo、Gli1及侵袭转移相关分子MMP9 mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:1.在MGC-803细胞中,Hedgehog信号通路关键组件分子Smo、Gli1蛋白均有表达。2.应用Cyclopamine处理MGC-803细胞后,Transwell实验显示,穿越小室的细胞数目较对照组减少。3.应用ANP处理MGC-803细胞后,Smo、Gli1 mRNA及蛋白表达水平均显著下降。4.应用Cyclopamine处理MGC-803细胞后,Smo、Gli1、MMP9 mRNA及蛋白的表达水平均显著下降;同时应用ANP及Cyclopamine后,Smo、Gli1、MMP9 mRNA及蛋白的表达水平与仅应用Cyclopamine的差异没有统计学意义。结论:1.Hedgehog信号通路在MGC-803细胞处于激活状态。2.Cyclopamine能够抑制Hedgehog信号通路的激活,降低MMP9的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。3.ANP能够抑制Hedgehog信号通路的激活,进而抑制MMP9的表达,影响胃癌细胞MGC-803的侵袭和转移。