Interleukin23基因在毕赤酵母中的诱导表达

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背景:作为一个在结构和功能上同白介素-12类似的细胞因子——白介素-23,在近期已经成为细胞因子研究中的热点。白介素-23是由活化的Ⅰ型巨噬细胞和树突状细胞分泌,在记忆性T淋巴细胞的分化和增殖过程中起重要作用。它还是连接固有免疫应答和适应性免疫应答的桥梁。已有研究证实白介素-23与几类炎性疾病的发生密切相关,比如类风湿性关节炎、肠炎、幽门杆菌引起的胃炎、牛皮癣、银屑病等。白介素-23诱导Th1型免疫应答的能力是其与炎性疾病发生相关的基础。此外,细胞因子白介素-23和白介素-12部分地决定了免疫应答的走向是Th17还是Th1类型。越来越多的研究表明了细胞因子白介素-23在免疫系统中的重要作用。   目的:为了进一步研究白介素-23的免疫学功能,构建了白介素-23毕赤酵母菌表达质粒并进行了表达。   方法:使用Invitrogen公司的EasySelectTMPich-ia Exp ression Kit系统中的毕赤酵母菌株X-33和质粒p-PICZα-A,分别经由载体构建、转化、筛选、诱导和检测等步骤获得能够表达白介素-23的酵母克隆。   结果:通过overlap PCR,成功将白介素-23的两个亚基p19、p40连接,并在两亚基连接处添加有由5个柔性氨基酸构成的连接子。将含有p19、p40 cDNA克隆至分泌型表达载体pPICZα-A。获得的阳性克隆,使用兔抗his一抗,行Western blot检测,发现在诱导的上清中仅在24h、36h诱导的两个时间点中能检测到72kd位置的条带。而沉淀中24h后的时间点中均可检测到少量表达。   结论:成功构建了白介素-23的毕赤酵母表达载体并初步获得了能表达白介素-23的酵母菌株。为进一步要展开的针对白介素-23活性研究打下了良好的基础。
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