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研究背景： 近些年来随着外科手术和血管介入技术的不断进步和发展，外科手术量日益增多，随之而来的围术期器官保护已成为临床工作中不可忽视的一部分。在围术期，器官组织的缺血再灌注损伤现象时有发生，因此采取一定措施预防或者治疗这种组织和器官的损伤可有效地降低围术期器官损伤的发生率，促进术后患者的康复和康复质量。最近有研究发现右美托咪啶可以减轻大鼠心脏等脏器的缺血再灌注损伤，而组织器官的缺血再灌注损伤的病理生理机制有多种细胞参与。血管内皮细胞作为组织与血液的最直接屏障，其在缺血再灌注损伤的病理生理过程中发挥着重要作用，至今右美托咪啶是否对该细胞具有保护作用还没有明确报道，我们猜想血管内皮细胞是右美托咪啶作用的重要靶点之一，或许参与了右美托咪啶发挥器官保护的作用。为此，在本研究中通过建立人来源的血管内皮细胞氧糖剥夺再复氧损伤细胞模型来探究右美托咪啶对它的影响。 研究目的： 探究右美托咪啶预处理对人脐静脉内皮细胞氧糖剥夺再复氧损伤的影响。 研究方法： 常规贴壁培养的HUVECs消化传代后，随机分组处理。将氧糖剥夺再复氧处理组给予无糖无血清的Hank’s液后，置于含94%氮气、5%二氧化碳、1%氧气的37℃恒温细胞培养箱内做氧糖剥夺处理。药物处理组在氧糖剥夺前给予药物处理后也按这种方式做氧糖剥夺处理。氧糖剥夺处理后取出细胞培养皿，换掉现有培养液，加入含糖含血清的正常细胞培养基置于正常环境下培养，即做再复氧处理。正常培养组置于正常条件下培养。实验处理结束后，用cck-8细胞活性检测液检测各组细胞活力。用乳酸脱氢酶试剂盒检测细胞培养基中乳酸脱氢酶活力，以此反映各组细胞的损伤水平。同时用活性氧检测探针DCFH-DA标记细胞内活性氧簇，用钙离子荧光探针Fluo-3 AM标记细胞内钙离子。之后用流式细胞仪检测各组细胞内荧光水平；以此来反映各组处理后细胞内活性氧水平和钙超载程度。并采用蛋白免疫印迹实验分析各处理组内部分子变化。通过线粒体压力实验来分析DEX对HUVECs线粒体呼吸能力的影响。 研究结果： 1. 右美托咪啶预处理对氧糖剥夺再复氧条件下HUVECs具有保护作用。 (1) DEX预处理提高了氧糖剥夺再复氧处理后HUVECs的活力 通过cck-8检测液检测实验处理完毕后各组的细胞活力，氧糖剥夺再复氧处理可以明显降低细胞活力。而随着DEX药物预处理浓度上升，细胞活力逐渐上升。其中10umol/L组和50umol/L组与氧糖剥夺再复氧组相比细胞活力升高（p＜0.05）。 (2) DEX预处理对氧糖剥夺再复氧条件下HUVECs的保护作用被育亨宾削弱。 与正常培养组相比，氧糖剥夺再复氧组细胞活力降低（p＜0.05），培养液乳酸脱氢酶活力升高（p＜0.05）；与氧糖剥夺再复氧组相比，50umol/L DEX预处理组细胞活力升高（p＜0.05），培养液中乳酸脱氢酶活力下降（p＜0.05）；与50umol/L DEX预处理组相比，育亨宾联合DEX预处理组细胞活力下降（p＜0.05），培养液中乳酸脱氢酶活力升高（p＜0.05）。 (3) DEX预处理减轻氧糖剥夺再复氧条件下HUVECs活性氧产生水平。 通过活性氧检测探针检测实验处理完毕后各组细胞内ROS产生水平；与正常培养组相比，氧糖剥夺再复氧组细胞内活性氧水平明显升高（p＜0.05）；与氧糖剥夺再复氧组相比，50umol/L DEX预处理组细胞内活性氧水平降低（p＜0.05）；与50umol/L DEX预处理组相比，育亨宾联合DEX预处理组细胞内活性氧水平升高（p＜0.05）。 (4) DEX预处理减轻氧糖剥夺再复氧条件下HUVECs钙超载水平。 采用钙离子荧光探针来检测实验处理完毕后各组细胞内钙超载水平；与正常培养组相比，氧糖剥夺再复氧组细胞内钙离子水平明显升高（p＜0.05）；与氧糖剥夺再复氧组相比，50umol/L DEX预处理组细胞内钙离子水平降低（p＜0.05）；与50umol/L DEX预处理组相比，育亨宾联合DEX预处理组细胞内钙离子水平升高（p＜0.05）。 (5) DEX预处理提高了HUVECs 在氧糖剥夺再复氧条件下AMPKα的磷酸化水平。 使用蛋白免疫印迹实验来检测各组细胞内AMPKα磷酸化水平；与正常培养组相比，氧糖剥夺再复氧组细胞内AMPKα磷酸化水平升高（p＜0.05）；与氧糖剥夺再复氧组相比， 50umol/L DEX预处理组细胞内AMPKα磷酸化水平升高 （ p＜0.05 ）；与50umol/L DEX预处理组相比，育亨宾联合DEX预处理组细胞内AMPKα磷酸化水平降低（p＜0.05）。 2. 右美托咪啶可以提高HUVECs线粒体有氧呼吸能力。 (1) DEX通过激活α2受体促进HUVECs内AMPKα分子的磷酸化。 用蛋白免疫印迹来检测各组HUVECs内AMPKα磷酸化水平；与PBS组相比， 50umol/L DEX组AMPKα磷酸化水平升高（p＜0.05）；与50umol/L DEX组相比，育亨宾联合DEX处理组细胞内AMPKα磷酸化水平降低（p＜0.05）。 (2) DEX通过激活α2肾上腺素受体提高HUVECs线粒体有氧呼吸能力。 用线粒体压力实验来检测各组线粒体有氧呼吸能力；其中与PBS组相比，50umol/L DEX组线粒体基础氧耗速率升高（p＜0.05），最大氧气消耗速率升高（p＜0.05），线粒体ATP产生能力升高（p＜0.05）；与50umol/L DEX组相比，育亨宾联合DEX处理组细胞线粒体基础氧耗速率降低（p＜0.05），最大氧气消耗速率降低（p＜0.05），线粒体ATP产生能力降低（p＜0.05）。 研究结论： 右美托咪啶预处理可以通过激活α2肾上腺素受体来提高AMPKα分子的磷酸化水平，进而提高线粒体有氧呼吸能力来减轻HUVECs在氧糖剥夺再复氧处理下的损伤。