麝香百合和仙客来转Mn-SOD基因植株的获得及其耐热性鉴定

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本研究以麝香百合、仙客来为材料,通过农杆菌介导法将Mn-SOD基因转入植株中,通过筛选、检测,获得转Mn-SOD基因植株,并研究高温逆境胁迫对转基因和未转基因植株的生理机制的影响,从而为提高其耐热、抗衰老及其他方面的抗胁迫能力,实现品种的抗性改良奠定基础。主要研究结果如下:1通过农杆菌介导法获得麝香百合抗性植株通过研究Mn-SOD基因转化中影响叶片转化效率的多种因素,包括Kan浓度、抑菌素浓度、预培养时间、共培养时间,侵染菌液浓度和侵染时间等,确立了50mg/LKan,500mg/LCef,2d的预培养,3d的共培养,OD600为0.6,侵染10min的麝香百合遗传转化体系,并获得了百合抗性植株。2筛选出仙客来块茎诱导不定芽培养基和不定芽生根培养基以仙客来种子萌发产生的块茎为外植体,诱导分化不定芽的最适培养基为MS+2.0mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA,并且遮光处理可提高分化率。仙客来不定芽最适生根培养基为1/2MS+1.0mg/LIBA或MS+1.5mg/LNAA。3外源基因的检测对31个百合抗性株系进行PCR扩增,结果有9个株系扩增出663bp的特异条带,而对照百合植株无特异性条带出现,初步证明外源基因已转入百合植株中。分别对PCR检测呈阳性的5个仙客来株系(由周连霞师姐转化所得)和9个百合株系进行Southern杂交检测,有3个仙客来株系检测到一条杂交带,证明Mn-SOD基因已经转入到仙客来基因组中;而在百合株系中,未检测出杂交条带。4转Mn-SOD基因仙客来和百合组培苗对高温的抗性测定了转基因和对照仙客来和百合组培苗在36℃高温胁迫下的生理反应,结果显示,转基因仙客来的SOD活性始终高于对照植株,细胞膜透性和MDA的含量上升的速度低于对照植株,可溶性蛋白含量高于对照植株,表明转基因植株的耐热性高于对照植株;转基因百合的SOD活性也高于对照植株,细胞膜透性上升的速度低于对照植株,可溶性蛋白含量高于对照植株,但MDA在转基因百合和对照百合植株中差异不明显。
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