LY294002联合奈达铂阻断PI3K/Akt通路对宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响

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目的:探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与奈达铂(NDP)单独及联合应用对宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响以及LY294002对NDP的增敏作用,并初步探讨其可能作用机制,方法:(1)采用溴化四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度的LY294002与NDP单独或联合应用对体外宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制率。(2)Western blot免疫印迹法检测LY294002、NDP单独或联合应用对体外宫颈癌HeLa细胞Bcl-2、Caspase-3、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达和活性的影响。结果:(1)LY294002、NDP均能抑制宫颈癌HeLa细胞生长,随着药物浓度的增加,细胞抑制率明显增加,P<0.05,差异具有统计学意义。每个药物浓度随着作用时间的延长,细胞抑制率逐渐增加,P<0.05,差异具有统计学意义。(2)LY294002可以增强HeLa细胞对NDP的敏感性。LY294002、NDP单药应用的细胞抑制率明显低于LY294002与NDP联合用药的抑制率,P<0.05,差异具有统计学意义。运用公式计算联合指数,提示联合作用时,具有协同性。(3)WesternBlot法分析结果表明:LY294002、NDP均能下调HeLa细胞Bcl-2蛋白表达,同时上调Caspase-3蛋白表达。且与LY294002、NDP单药应用比较,LY294002与NDP联合应用Bcl-2蛋白的表达率有显著降低,而Caspase-3蛋白表达率显著增高。(4)PI3K、Akt蛋白在宫颈癌HeLa细胞内均有表达,LY294002作用后能明显抑制HeLa细胞内p-PI3K、p-AKT的蛋白表达。结论:(1)PI3K特异性抑制剂LY294002及NDP均明显抑制宫颈癌HeLa细胞的体外增殖,且这种作用呈浓度及时间依赖性。(2)随着LY294002浓度的增加,HeLa细胞对NDP的敏感性逐渐增强,提示LY294002对NDP具有协同作用,抑制细胞增殖,增加HeLa细胞对NDP的敏感性。(3)LY294002能抑制HeLa细胞增殖、诱导其凋亡,该作用可能与下调Bcl-2蛋白表达,同时上调Caspase-3蛋白表达有关。(4)LY294002可抑制HeLa细胞p-PI3K、p-Akt蛋白的表达,提示抑制PI3K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制。
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