论文部分内容阅读
目的:传代并保存豆类丝核菌菌株,制备豆类丝核菌94-2A株次级代谢产物,利用传统致畸试验检测其是否对小白鼠产生致畸作用,并进一步利用行为畸胎学试验研究其是否对小白鼠后代行为学产生致畸作用。综合以上研究结果对豆类丝核菌次级代谢产物的安全性做出初步评价,为其作为一种新型的抗肿瘤药物应用于临床奠定理论基础。方法:(1)用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基对豆类丝核菌菌种进行传代与保存。(2)将豆类丝核菌94-2A株接种于改良Czapek’s培养基中25℃恒温培养14d,获取其次级代谢产物。(3)根据国家标准,并结合前人经验,利用传统致畸试验对豆类丝核菌94-2A株次级代谢产物进行致畸作用检测,自妊娠第6d起连续经口灌胃给药10d,灌胃量均为0.2ml/20g体重,每3d称重一次,调整灌胃量。于妊娠第20d脱颈处死孕鼠,剖腹取出子宫。观察记录每只孕鼠的胚胎植入数、活胎数、死胎数、吸收胎数及胎鼠发育情况,每只胎鼠分别测体重、体长、尾长、性别,检查外观畸形,然后每窝胎鼠取1/2用茜素红染色做骨骼畸形检查,余1/2胎鼠固定于Bouins液中作内脏畸形检查。根据其对小白鼠母体毒性、胎鼠外观、内脏、骨骼畸形数据,对其致畸作用做出综合评价。(4)利用行为畸胎学试验,自妊娠第6d起连续经口灌胃给药10d,灌胃量均为0.2ml/20g体重,每3d称重一次,调整灌胃量。孕鼠自然分娩,记录每窝仔鼠数。出生后第4d记录仔鼠4d存活率,并将各窝仔鼠数调整至6只,不足6只的母鼠予以淘汰,检测仔鼠生长发育、行为状态等各项指标,第28d仔鼠雌雄分笼饲养。通过对小白鼠后代生长发育、反射及协调运动能力、学习记忆能力、自主运动能力各方面数据的综合分析,对其行为致畸作用做出评价。结果:(1)对实验室保存菌种进行传代保存,每三个月传代一次。(2)豆类丝核菌94-2A株次级代谢产物培养液为深黄色,较清亮,悬浮物质少。(3)采用豆类丝核菌次级代谢产物半数致死量(LD50)226.46mg/kg(95%置信区间158.49～323.59mg/kg)的1/4、1/16、1/64作为实验剂量对昆明种小白鼠进行致畸作用实验研究,分别为抗肿瘤最大有效治疗剂量的3.50倍、0.86倍、0.22倍,最小有效治疗剂量的20.97倍、5.24倍、1.31倍。传统致畸试验结果显示,豆类丝核菌次级代谢产物除了高剂量组孕鼠在晚期出现体重增重减慢之外,其余指标与生理盐水组相比差异均不显著(P>0.05),而三个剂量组在胎鼠死胎率、吸收胎率、外观畸形率、骨骼畸形率、内脏畸形率各方面与阳性对照组相比差异均极显著(P<0.01)。(4)在行为致畸试验中,豆类丝核菌次级代谢产物高、中、低三个剂量组小鼠无论在母鼠妊娠、仔鼠体格发育、仔鼠反射、仔鼠协调运动能力、仔鼠记忆能力及自主活动能力方面与空白对照组相比均差异不显著(P>0.05),而与阳性对照组相比除每窝平均产仔数、旷场实验洗脸次数、排粪次数外,其他各项指标均差异极显著(P<0.01)。结论:结合传统致畸试验和行为致畸试验结果表明,在本实验剂量和条件下,豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠母体无明显毒性,对胎鼠不产生发育毒性和致畸作用,对小鼠不产生行为致畸作用。