西红花玉米黄质裂解酶基因转化番茄的研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinshouji1
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本试验以浙杂905、圣亚和富丹为材料,对农杆菌介导的番茄遗传转化体系进行了系统的研究。主要结果如下:1不同的种子消毒方式、种子培养基和番茄种子在培养基的不同放置方式是影响番茄种子萌发的主要因素。其中采用处理C(用70%的酒精消毒1 min.,然后用2%的次氯酸钠消毒10min.,无菌水冲洗3~5次)进行消毒,然后将番茄种子插入到培养基Ⅱ(1/2 MSB5 +1 %蔗糖+ 0.6 %琼脂pH 5.8)上时,有利于番茄种子的萌发,并且富丹种子的发芽率83.33%高于浙杂905种子的发芽率80.67%和圣亚种子的发芽率82.00%。2以番茄子叶为外植体的最佳再生培养基配比为(MSB5 +3%蔗糖+ 0.6 %琼脂+ BA2.0 mg/L + NAA0.1 mg/L + AgNO32.0 mg/L + Vc100mg/L pH 5.8),浙杂905、圣亚、富丹子叶的出愈率分别为92.67%、95.67%、93.33%;以番茄茎段为外植体的最佳再生培养基配比为(MSB5 +3%蔗糖+ 0.6 %琼脂+ BA2.0 mg/L + NAA0.2 mg/L + AgNO33.0 mg/L + Vc100mg/L pH 5.8)浙杂905、圣亚、富丹茎段的出愈率分别为79.33%、81.33%、87.00%。3番茄叶片外植体比茎段外植体对卡那霉素敏感,番茄子叶的适宜筛选浓度为50mg·L-1,番茄茎段的适宜筛选浓度为60mg·L-1;当头孢霉素浓度为500 mg·L-1时,可有效抑制农杆菌的生长。4影响番茄子叶转化率的因素,依次是苗龄>预培养>菌液浓度>共培养>侵染时间。五种因子的最佳水平组合配比为苗龄8-9d、预培养2d、菌液浓度(OD600=0.6)、共培养3d、侵染时间20min.。影响番茄茎段转化率的因素,依次是预培养>菌液浓度>苗龄>共培养>侵染时间。五种因子的最佳水平组合配比为预培养3d、菌液浓度(OD600=0.6)、苗龄4-5d、共培养4d、侵染时间15min.。5对再生植株经PCR检测证明CsZCD基因已成功整合到浙杂905和圣亚基因组中。
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