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锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）是一种高传染性,高致病性,高死亡率的锦鲤疱疹病毒病（Koi herpesvirus disease,KHVD）的病原体又称鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3）。自20世纪90年代末首次对KHV报道以来,这种病毒已经在世界范围内流行,对锦鲤和鲤鱼养殖产业造成重大经济损失。KHV作为水生动物疫病病毒越来越被重视。KHVD的诊断方法和相关防治措施的研究越来越深入,但至今仍未开发出有效治疗该病的药物和疫苗。虎杖提取物中蒽醌化合物具有多种药理作用包括抗病毒,抗菌,抗炎,抗癌等多种特性。多项研究已证实蒽醌类化合物对HSV-1、HSV-2、HIV、SARS、乙型肝炎病毒、流感病毒等均表现出一定的抑制作用。本研究旨在检测虎杖蒽醌提取物对KHV感染的抗病毒活性,试图发现用于治疗锦鲤疱疹病毒病有效药物制剂。研究内容及结果如下:1.虎杖蒽醌提取物及阳性对照药物利巴韦林在CCB细胞中最大安全浓度的测定。采用MTT法和CPE镜检法检测48 h内虎杖蒽醌提取物和广谱性抗病毒药物利巴韦林对CCB细胞的毒性作用。设置8组不同浓度的虎杖蒽醌提取物1.96μg/ml、3.91μg/ml、7.28μg/ml、15.63μg/ml、31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml的实验组,9组不同浓度的利巴韦7.28μg/ml、15.63μg/ml、31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml、2000μg/ml、4000μg/ml及无药物作用的对照组。试验结果表明:虎杖蒽醌提取物浓度在31.25μg/ml时,细胞存活率达80%以上。虎杖蒽醌提取物和阳性对照药物利巴韦林在CCB细胞中的CC50分别为72.67±2.12μg/ml和2638.79±2.36μg/ml。31.25μg/ml的虎杖蒽醌提取物不会影响CCB细胞形态或细胞密度的明显变化,在细胞毒性试验中被认定为最大无毒浓度,同时低浓度范围内（≤31.25μg/ml）细胞毒性基本为零,且存在一定的促进CCB细胞增殖的情况。2.虎杖蒽醌提取物抗KHV病毒活性效果的研究。确定虎杖蒽醌提取物（1.96-31.25μg/ml）和利巴韦林（15.63-500μg/ml）最大无毒范围后进行病毒复制抑制试验。结果显示虎杖蒽醌提取物浓度为31.25μg/ml时达到最大抑制率为78.63±5.47%,IC50=13.67±0.47μg/ml,TI（Pc）=5.48±0.49;阳性对照药物利巴韦林IC50=492.15±2.13μg/ml,TI（R）=5.36±0.03。在直接杀灭病毒试验中,虎杖蒽醌提取物也显示出一定的直接杀灭KH V病毒粒子的能力,最高病毒抑制率为32.21%。预先给药孵育的CCB细胞未产生抗K HV病毒吸附的能力,CPE镜检发现药物预先孵育组,与阴性KHV病毒对照组无明显差异。同时RT-PCR结果显示在0.1TCID50 KHV病毒感染组中31.25μg/ml虎杖蒽醌提取物显示出良好的抗KHV病毒的能力,完全抑制KHV生命周期相关基因的转录。在动物攻毒试验中,虎杖蒽醌提取物也显示出较高的抗KHV病毒活性,延长试验鲤鱼死亡数时间,提高攻毒鲤鱼存活率。