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目的1.研究盐酸川芎嗪在活性氧损伤的病理状态下对血管内皮的保护作用。2.研究颈动脉结扎大鼠模型大脑中动脉张力振荡的机制及模型中盐酸川芎嗪的血管保护作用。3.调查颈动脉狭窄对缺血性脑卒中病人颅内血流动力学的影响,从而探究活血化瘀中药临床应用的切入点。方法1.动物实验(1)在离体实验用H2O2孵育SD大鼠胸主动脉制作活性氧介导的血管内皮依赖性舒张损伤模型,在血管张力实验、蛋白印迹法检测eNOS, Nitrotyrosine、SOD-1表达实验、用荧光探针法在激光扫描共像聚焦显微镜下观察超氧阴离子水平实验中共同研究盐酸川芎嗪改善血管内皮依赖性舒张的机制。血管张力实验用多元线性回归分析求得Emax和pD2,以双因素方差分析(Two way ANOVA)的方法进行统计学显著性检验,P<0.05为差异有显著性；蛋白印迹法和荧光探针法在激光扫描共像聚焦显微镜下观察超氧阴离子水平实验应用多组比较采用单因素方差分析(One Way ANOVA),组间比较采用Bonfferoni t检验,P<0.05为差异有显著性；所有结果均用中位数±标准误表示。(2)颈内动脉结扎法制作脑缺血的SD大鼠模型,并用血管张力实验研究盐酸川芎嗪体外孵育和体内给药对模型大脑中动脉张力振荡的机制。实验动物表现采用Longma的4级5分法进行评分,两组间比较用student t检验,P<0.05为差异有显著性；由于大脑中动脉血管舒缩活动的频率和幅度不规则,仅做现象观察,不做统计分析。2.临床研究本课题调查广东省中医院脑血管中心2007年1月到2007年12月住院确诊为缺血性脑卒中的患者,分析入组病人颈动脉彩色多普勒超声检验结果,将缺血性脑卒中病人分为颈动脉正常组、颈动脉狭窄组,颈动脉狭窄组再分为轻度、中度、重度、闭塞四组；采集经颅多普勒各颅内血管的血流速度,分析各组病人大脑中动脉和大脑前动脉平均血流速度(VMCA和VACA)、两侧大脑中动脉平均血流速度差ABS(VLMCA-VRMCA)、两侧大脑前动脉平均血流速度差ABS(VLACA-VRACA)、大脑中动脉与大脑前动脉平均血流速度差ABS(VMCA-VACA)。数据处理和统计学分析采用SPSS 17.0统计软件进行分析,两组间的方差齐性检验采用F检验；两组样本符合正态分布、方差齐同采用student t检验进行两组间差异的检验,不符合者使用Mann Whitney u检验或者Wilconxon paired秩和检验；多组样本考虑每组样本量较少,不符合连续性正态分布,采用Kruskal-Wallis秩和检验进行多组间的多重比较；P<0.05表示统计学有显著差异。符合连续性正态分布数值采用均值±标准差表示；不符合连续性正态分布或者方差不齐的数值采用中位数±标准误表示。结果1.动物实验：(1) 200μM H2O2 1 hr的体外孵育可以损伤SD大鼠胸主动脉血管内皮依赖性舒张,过氧化氢酶、NADPH氧化酶抑制剂、盐酸川芎嗪、Losartan、维他命E均可以改善这种损伤,并不是通过增加了eNOS、SOD的表达和降低了Nitrotyrosine的表达来实现的；iNOS抑制剂加重了这种损伤。(2)H2O2可以显著增加血管内皮细胞的超氧阴离子水平,NADPH氧化酶抑制剂、超氧化物歧化酶、盐酸川芎嗪均可以降低超氧阴离子的水平。(3)经过颈内动脉结扎6 hr的SD大鼠精神可,呼吸和体温正常,颈动脉结扎组大鼠的神功功能缺损得分显著高于对照组(P<0.05),主要表现为向右侧转圈。(4)正常的SD大鼠在10μM的serotonin或0.1μM U46619的诱导下可以发生一定的收缩,收缩至平台期张力平稳；经过颈内动脉结扎6 hr的SD大鼠大脑中动脉在10μM的serotonin或0.1μM U46619的诱导下发生不规律的张力振荡；两组在60mM高钾平衡液诱导下脑中动脉均发生稳定收缩,电压门控钙离子通道抑制剂、肌浆膜Ca2+-ATPase泵抑制剂、Ca2+-K+通道的抑制剂、Na+-K+-ATPase泵抑制剂均可以抑制模型大脑中动脉的张力振荡；电压门控钙离子通道开放剂可以增强模型大脑中动脉的张力振荡；电压门控钾离子通道抑制剂对模型大脑中动脉的张力振荡没有影响。(5)经过1 nM盐酸川芎嗪1 hr的孵育,模型大脑中动脉没有出现张力震荡;按照4.11mg/kg用盐酸川芎嗪给模型进行静脉注射,大脑中动脉张力震荡被显著抑制。2.临床研究相对颈动脉正常组,伴颈动脉狭窄缺血性脑卒中病人的VMCA、VACA、ABS(VMCA-VACA)显著升高(P<0.05),ABS(VLMCA-VRMCA)和ABS(VLACA-VRACA)没有显著差异(P>0.05)；不同程度的颈动脉狭窄病人颅内血流动力学无显著差异(P>0.05)；单侧颈动脉狭窄的缺血性脑卒中病人病变同侧的VMCA较病变对侧显著降低(P<0.05); VACA较病变对侧显著增高(P<0.05); ABS(VMCA-VACA)较病变对侧比较无显著差异(P>0.05)。结论1.H2O2损伤胸主动脉血管内皮依赖性舒张的模型是成功的,通过激活NADPH oxidase产生O2.-损伤血管的内皮细胞,引起血管内皮依赖性舒张障碍。2.盐酸川芎嗪小剂量短时间的孵育可以部分逆转H2O2对胸主动脉血管内皮依赖性舒张,是一种强有效的抗氧化剂。3.颈动脉结扎大鼠模型的复制是成功的,模型诱导的大脑中动脉血管舒缩活动可能与启动细胞膜和肌浆网的离子通道引发细胞质钙离子浓度增高。4.小剂量的盐酸川芎嗪短时间的体内和体外治疗均可以抑制颈动脉结扎大鼠诱导的大脑中动脉血管舒缩活动。5.颈动脉狭窄可以影响缺血性脑卒中病人的颅内血流速度。