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目的:研究转化生长因子β1 (TGF-β1)和干扰素-γ(IFN-γ)对气道上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的调控作用及其信号转导途径。方法:原代培养新西兰兔气道上皮细胞,待细胞生长融合成片(细胞生长第5天)进行以下实验:(1)实验1:将培养细胞随机分为8组,4个实验组加入终浓度为10ng/ml的TGF-β1,4个对照组加入等量无血清培养液,然后分别于6h、12h、24h、36h收集细胞,用免疫细胞化学法检测各组气道上皮细胞CTGF蛋白表达水平;(2)实验2:将培养细胞随机分为4组,3个实验组分别加入不同浓度的TGF-β1 (1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml),对照组加入等量无血清培养液,用免疫细胞化学法检测各组气道上皮细胞CTGF蛋白表达水平,用原位杂交法检测各组气道上皮细胞Smad7 mRNA表达水平;(3)实验3:将培养细胞随机分为4组,3个实验组加入终浓度为10ng/ml的TGF-β1的同时分别加入不同浓度的IFN-γ(10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml),对照组加入等量TGF-β1的同时加入等量无血清培养液,用免疫细胞化学法检测各组气道上皮细胞CTGF蛋白表达水平,用原位杂交法检测各组气道上皮细胞Smad7 mRNA表达水平。结果:(1)TGF-β1与气道上皮细胞CTGF蛋白表达的时效关系:TGF-β1处理6h组(0.2518±0.04402)、12h组(0.4547±0.01835)、24h组(0.6533±0.0652)、36h组(0.5513±0.0391)CTGF蛋白表达均较对照组显著增强,差异有显著性(P均<0.01)。各实验组组间比较差异有显著性(P均<0.01),其中TGF-β1处理24h组CTGF蛋白表达最强;(2)TGF-β1与气道上皮细胞CTGF蛋白表达的量效关系:TGF-β1处理5ng/ml组(0.4038±0.0293)、10ng/ml组(0.6533±0.0127)CTGF蛋白表达均较对照组(0.1097±0.0224)显著增强,差异有显著性(P均<0.01)。各实验组组间比较差异有显著性(P均<0.01),其中TGF-β1处理10ng/ml组CTGF蛋白表达最强。提示随TGF-β1浓度的增加,CTGF蛋白表达增强呈剂量依赖性;(3)TGF-β1对气道上皮细胞Smad7 mRNA表达的影响:TGF-β1处理1ng/ml组(0.1528±0.0641)、5ng/ml组(0.193±0.017)、10ng/ml组(0.206±0.0198)Smad7 mRNA表达水平与对照组(0.1519±0.0582)比较,差异无显著性(P均>0.05);各实验组组间比较差异亦无显著性(P均>0.05)。提示TGF-β1浓度变化对Smad7 mRNA表达水平影响不大;(4)IFN-γ对气道上皮细胞CTGF蛋白表达的影响:IFN-γ处理10ng/ml组(0.5005±0.0243)、20ng/ml组(0.3466±0.0224)、50ng/ml组(0.1417±0.0243)CTGF蛋白表达均较对照组——TGF-β110ng/ml组(0.6533±0.0652)明显减弱,差异有显著性(P均<0.05);各实验组组间比较差异亦有显著性(P均<0.05),其中IFN-γ处理50ng/ml组CTGF蛋白表达最弱。