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背景艾叶为菊科(Compositae)蒿属多年生草本植物艾(Artemisia argyi Levl.et Vant.)的干燥叶,为临床妇科常用中药之一。现代研究发现艾叶中主要含有萜类、黄酮、苯丙素、芳香酸(醛)、甾体及脂肪酸等化学成分,具有镇痛、止血、抗菌抗病毒、抗肿瘤、抗诱变、降血糖、平喘、免疫调节、抗氧化等多种生物活性。中医理论认为,艾叶具有温经之功效,而温经又与活血密切相关,因此我们推测艾叶可能具有活血的作用。通过初步的活性筛选我们发现艾叶的乙酸乙酯部位具有较强的抗凝血活性,但目前对艾叶抗凝血活性相关的研究未见报道,为明确艾叶抗凝血作用的物质基础,本课题开展艾叶乙酸乙酯部位化学成分及其抗凝血活性的研究,以期为明确艾叶抗凝血作用的物质基础和发现具有抗凝血活性的先导化合物提供依据;为阐明艾叶温经传统功效的科学内涵奠定基础。目的(1)研究艾叶乙酸乙酯部位化学成分;(2)对艾叶乙酸乙酯部位及分离的部分单体化合物进行抗凝血活性研究。方法采用硅胶柱层析(silica gel column chromatography),葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex-LH20),ODS,大孔吸附树脂以及重结晶等方法对艾叶乙酸乙酯部位进行系统的分离纯化,并运用现代波谱技术(IR,UV,1H-NMR,13C-NMR,DEPT,HMBC,HSQC,1H-1H-COSY,NOESY,HRESI-MS)及理化方法或直接与标准品对照鉴定化合物的结构。(2)用Born比浊法对艾叶乙酸乙酯部位及从中分离得到的部分单体化合物进行体外抗凝血活性研究。结果(1)从艾叶乙酸乙酯部位共分离得到34个化合物,其中黄酮类化合物17个:异泽兰黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1*),5,6,’2’,4’-四羟基-7,5’-二甲氧基黄酮(2*);异泽兰黄素(3),矢车菊黄素(4),棕矢车菊素(5),5,7,4’-三羟基-6,3’,5’-三甲氧基黄酮(6),高车前素(7),蓟黄素(8),5,7,3’-三羟基-6,4’,5’-三甲氧基黄酮(9),芹菜素(10),5,3’,4’-三羟基-6,7-二甲氧基黄酮(11),5,7,3’,4’-四羟基-6,5’-二甲氧基黄酮(12),木犀草素(13),泽兰黄酮(14),异槲皮苷(15),大豆苷元(16),(S)-5,7,3’,5’-四羟基二氢黄酮(17);倍半萜类化合物5个:armexifolin(18),chloroklotzchin(19),arglanin(20),ridentin(21),tanaphillin(22);单萜类化合物1个:1S,2R,4S-trihydroxyl-p-methane(23);苯丙素类化合物4个:伞形花内酯(24),东莨菪内酯(25),6-甲氧基香豆素(26),咖啡酸(27);酚酸(醛)类化合物5个:邻羟基苯甲酸(28),邻羟基苯甲醛(29),3,4-二羟基苯甲醛(30),原儿茶酸(31),龙胆酸5-O-β-D-(6’-水杨酰基)-葡萄糖苷(32);甾醇类化合物1个:β-谷甾醇(33);肌醇1个:D-3-甲氧基肌醇(34);其中化合物1和2为新化合物。(2)对艾叶乙酸乙酯部位及从中分离得到的10个黄酮类单体化合物采用Born比浊法进行抗凝血活性研究,实验结果显示艾叶乙酸乙酯部位具有较强的抗凝血活性,10个化合物中化合物1、2、3、5、6、14、15、17、32均表现出显著的抗凝血活性,其中化合物5、15、17、32均能显著延长TT、PT,而化合物32的抗凝血作用最强,说明它们可能通过外源性和共同凝血系统途径而发挥抗凝血作用;化合物1、3、6、14均能显著延长TT时间,提示这些化合物可能通过共同凝血途径而发挥抗凝血作用;化合物2则显著延长PT,而化合物7则明显的缩短了TT。结论(1)从艾叶乙酸乙酯部位分离得到34个单体化合物,其中化合物1和2为新化合物,化合物6、8、1112、1523、2627、2931、34均为首次从该植物中分离得到;(2)通过体外抗凝血活性研究发现:与空白组相比,化合物1、2、3、5、6、14、15、17、32均具有显著体外抗凝血活性,提示艾叶中确实含有抗凝血活性成分。