【摘 要】
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目的:目前，异种移植是治疗各种终末期疾病最有效的策略之一。对免疫排斥的实时监测对移植物的长期存活是至关重要的。循环游离DNA是器官损伤和优化免疫抑制剂剂量潜在的非侵入
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目的:目前，异种移植是治疗各种终末期疾病最有效的策略之一。对免疫排斥的实时监测对移植物的长期存活是至关重要的。循环游离DNA是器官损伤和优化免疫抑制剂剂量潜在的非侵入生物标记物。在本研究中，猪特异的游离DNA(cpsDNA)作为生物标记物在异种移植模型中进行了评价。 方法:利用高通量测序和生物信息学分析对潜在的cpsDNA进行挑选，并对设计引物的物种特异性进行PCR验证;随后，通过补体依赖的毒性试验体外评估cpsDNA与超急性排斥与急性排斥反应的相关性;然后，通过猪-小鼠细胞移植/活体成像模型评价cpsDNA的早期诊断作用以及对雷帕霉素的治疗应答;最后，在猪-猴子动脉补片移植模型中监测cpsDNA水平变化。 结果:(i)测序结果显示，动脉补片移植猴血浆中cpsDNA含量极低，平均0.0165％±0.0151％，与对照组（0.0233％±0.0235％）无显著差异;(ii)基于猪特异表达基因序列，通过PCR筛选得到1条（＃4）在人和非人灵长类基因组中特异扩增的引物，2条（＃11和＃14）在小鼠基因组中特异扩增的引物，并分别建立了qPCR定量标准曲线;(iii)cpsDNA在体外与超急性和急性排斥反应具有高度相关性;(iv)在猪-小鼠细胞移植/活体成像模型中，cpsDNA反映异种移植物的luciferase信号丢失与淋巴细胞浸润高度相关，并先于抗猪IgM/IgG抗体上升，说明cpsDNA是更为早起、特异、非侵入的生物标记物;(v)cpsDNA水平变化反映免疫抑制剂-雷帕霉素的治疗效果;(vi)在猪-猴动脉补片移植模型中，可检测出cpsDNA的动态变化，并可反映排斥反应状态。 结论:监测cpsDNA水平是一种微创、更特异、敏感的、低成本的生物标志物，可用于异种移植排斥反应及免疫抑制治疗优化的监测。
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