全人源抗TRAIL-R1单克隆抗体提高TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:STTELA
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目的:研究本组制备的全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体TRAIL-R1-404(TR1-400)与TRAIL联合应用诱导肿瘤细胞的凋亡作用。  方法:利用感受态细胞转导TR1-404抗体质粒,提取质粒进行鉴定;转染293T细胞表达抗体,使用ELISA法检测TR1-400抗体表达;进一步用CHO大量表达系统制备抗体并用Protein G纯化得到精制蛋白TR1-404抗体;通过流式细胞分析使用制备的TR1-404抗体检测DU145和Huh-7细胞表面TRAIL-R1的表达和结合能力;MTT实验检测TRAIL和TR1-404抗体单独以及两者联合诱导DU145和Huh-7肿瘤细胞的凋亡作用。  结果:酶切和测序的方法鉴定转导的TR1-404抗体质粒与已知TR1-404抗体序列一致;ELISA方法检测转染293T细胞表达TR1-404抗体,抗体蛋白浓度为159.6226ng/ul;利用CHO系统制备并精制抗体蛋白,获得高浓度TR1-400抗体用于实验;流式细胞分析TR1-400抗体与DU145和Huh-7细胞表面表达TRAIL-R1结合;不同浓度的TRAIL作用DU145和Huh-7肿瘤细胞,仅在48小时浓度在1ug/ml时对Huh-7肿瘤细胞有诱导凋亡作用,在48小时对DU145有诱导肿瘤细胞凋亡效果(t=2.533,P<0.05),且呈浓度依赖性;TR1-404抗体单独作用DU145和Huh-7肿瘤细胞,没有观察到细胞凋亡作用;TRAIL与TR1-400抗体联合作用DU145和Huh-7肿瘤细胞,Huh-7肿瘤细胞仍没有发生凋亡,但是对DU145肿瘤细胞提高杀伤作用(t=2.352,P<0.05)。  结论:本研究证明我组制备的全人源抗人TRAIL-R1单抗与TRAIL单独应用对不同肿瘤细胞有不同的诱导凋亡作用,联合应用可促进部分肿瘤细胞凋亡,然而对有些肿瘤细胞没有作用,为抗肿瘤治疗以及研究肿瘤耐药提供基础数据。
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