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目的： 年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）是主要的致盲性眼病之一。依据其临床和病理表现，分为两大类，即干性AMD和湿性AMD。其中，约有10%-20%的干性AMD可以转化为湿性AMD，最终形成脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）而致盲。虽然临床上针对湿性AMD的抗血管内皮生长因子（VEGF）的治疗可以有效地改善或稳定由CNV引起的视力损伤，但只有30%-40%的病人对治疗发生反应，绝大部分病情甚至出现恶化。因为VEGF对神经视网膜和脉络膜具有营养作用，长期抗VEGF治疗易导致视网膜的萎缩。并且反复玻璃体腔注射，会带来相应的副作用，如：视网膜脱离、眼内炎症、眼内出血等。因而寻找有别于抗VEGF的治疗方案，来治疗湿性AMD迫在眉睫。研究表明，血管内皮细胞生长因子（VEGF）、炎症细胞以及炎症因子的富集，对实验性脉络膜新生血管的形成有着重要的作用。另外，丝氨酸消旋酶（serine racemase，SR）的产物D-丝氨酸(D-serine)，激活NMDA受体后，可影响下游一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）的活性，调节一氧化氮（nitric oxide，·NO）的产生，·NO可以促进视网膜及脉络膜新生血管的形成。由此，我们推测SR可能在CNV的形成过程中起着一定的作用。因此，本课题从体内和体外实验研究SR在实验性CNV模型中的作用机制，以进一步探索SR在临床上治疗AMD的理论依据，最终提供新的药物作用靶点。 方法： 一、检测RPE细胞中SR的表达 分别从人RPE细胞系(ARPE-19细胞)、小鼠原代RPE细胞中提取蛋白质和RNA，采用western blot和RT-PCR检测Srr mRNA的转录和SR蛋白的表达。 二、检测CNV模型中脉络膜-RPE组织内SR的表达水平 激光光凝处理WT小鼠眼底，第七天取脉络膜-RPE组织进行匀浆，采用western blot，检测WT小鼠CNV模型组与未处理组脉络膜-RPE组织内SR的表达情况。 三、检测SR在CNV模型中对新生血管的作用： (1) 激光光凝处理WT、Srr-/-小鼠眼底，第七天取其眼球进行脉络膜铺片，分别用Alexa Fluor 594-conjugated isolectin GS-IB4和CD31染色，在激光共聚焦显微镜（confocal）下观察脉络膜新生血管的变化，用Volocity和Image-J软件，分别计算CNV体积和面积。 (2) 激光光凝处理WT、Srr-/-小鼠眼底，第七天取其眼球做冰冻切片，进行CD68免疫荧光，检测激光损伤处巨噬细胞的浸润情况。 (3) 激光光凝处理WT、Srr-/-小鼠眼底，第七天取脉络膜-RPE组织进行匀浆，利用western blot检测p-VEGFR2的表达情况。 四、检测SR缺失对NOS的表达以及炎症因子分泌的影响 (1) 在CNV模型中，第七天取WT、Srr-/-小鼠脉络膜-RPE组织进行匀浆，western blot检测两组小鼠组织内iNOS、nNOS以及eNOS的表达情况。 (2) 采用细胞共培养以及Transwell实验检测WT、Srr-/-小鼠的原代RPE细胞在炎症状态下对内皮细胞（RF/6A）迁移的影响，同时收集RPE细胞的培养基，通过ELISA检测其中·NO以及VEGF的含量。用western blot检测两组小鼠原代RPE细胞中iNOS的表达量。 结果： 1. 人RPE细胞系以及小鼠原代RPE中均有SR的表达。 2. 激光诱导脉络膜新生血管后，在血管形成高峰期，脉络膜-RPE组织内SR表达上调（p＜0.05）。 3. 在CNV模型中，Srr-/-小鼠的脉络膜新生血管的程度、巨噬细胞的浸润程度明显低于WT小鼠。Srr-/-小鼠组脉络膜-RPE组织内p-VEGFR2、iNOS、nNOS的表达WT小鼠脉络膜-RPE组织显著减少（p＜0.05），但eNOS的含量在两组内没有区别（p=0.69）。 4. 在炎症处理下，与Srr-/-小鼠原代RPE细胞相比，WT小鼠原代RPE细胞高表达iNOS（p＜0.05），并且能更好的促进RF/6A细胞的迁移。同时，下槽上清中·NO和VEGF的分泌也较Srr-/-小鼠组明显升高（p＜0.05）。另外，在WT小鼠原代RPE细胞中加入NOS的抑制剂之后，能明显的抑制上凹中培养的RF/6A细胞的迁移（p＜0.05）。 结论： SR的缺失可以通过降低RPE对炎症刺激的反应，从而减少·NO和VEGF的分泌，抑制巨噬细胞的侵袭和迁移，从而减少脉络膜新生血管的形成。