人21.5kD MBP基因沉默对神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响

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目的:探讨人脑21.5kD髓鞘碱性蛋白(MBP)基因沉默对神经胶质瘤U251细胞增殖与凋亡的影响。方法:(1)应用分子克隆技术,构建针对人21.5kD MBP基因的3个短发夹RNA(shRNA)重组质粒(pGenesil-1-MBP-1、pGenesil-1-MBP-2、pGenesil-1-MBP-3及1个阴性对照质粒pGenesil-1-MBP-neg),然后酶切并测序鉴定。(2)通过脂质体介导的途径将4个重组质粒转入神经胶质瘤细胞株U251中,24h后观察其转染率,并采用实时定量PCR方法检测U251细胞中的mRNA表达量,以此反映重组质粒的沉默效果。(3)以最佳沉默干扰质粒转染组为实验组,阴性对照质粒转染组为阴性对照组,脂质体空转染组为空白对照组,采用Westernblot方法检测MBP蛋白在这3组U251细胞中的表达情况,然后分别采用CCK-8细胞增殖实验及凋亡检测试剂Annexin V-PE检测MBP对细胞增殖与凋亡的影响。结果:(1)成功构建了4个shRNA重组质粒。(2)成功将4个重组质粒转入神经胶质瘤细胞株U251中,转染率达80%。pGenesil-1-MBP-3质粒转染组MBP的mRNA相对表达量最低,为最佳沉默质粒组(实验组)。(3)实验组的MBP表达量或细胞增殖活性都显著低于阴性对照和空白对照组(P<0.05),实验组的细胞凋亡率显著高于另2个组(P<0.05)。结论:人脑21.5KD MBP基因的高表达,可能与神经胶质瘤的发生与发展具有密切联系;人脑21.5kD MBP的基因沉默对神经胶质瘤U251细胞具有抑制增殖和促进凋亡的双重作用。
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