论文部分内容阅读
目的: 通过PCR-测序方法，探讨浙江地区汉族人线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA) COⅠ（细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ）基因G6179A多态性与2型糖尿病(type2 diabetes mellitus，T2DM)及其并发症的相关性。 方法: 1.根据1999年WHO糖尿病诊断标准，收集2009年2月至2013年2月在温州医科大学第一附属医院内分泌科住院并确诊为T2DM的散发病人505例（61.02±12.16），同时收集526例年龄相匹配的无糖尿病及家族史，无高血压、高血脂、肾病、心脑血管疾病以及口服葡萄糖耐量正常的健康体检者为正常对照（51.38±16.52）。采集两组样本的外周血，用EDTA-K2抗凝，并详细记录两组所有受试者的基本临床资料及有关的各项检查结果。 2.提取受试样本的外周血总DNA，通过聚合酶链反应(PCR)扩增线粒体DNA COⅠ基因区并进行一代测序。测序结果与剑桥参考序列(revisedCambridge Reference Sequence，rCRS)进行比对。 3.根据线粒体DNA6179位点的多态性变化，我们对疾病组和健康对照组进行分子分型，随后通过统计学方法分析G6179A多态性在糖尿病组与健康对照组的分布差异。 4.分析G6179A多态性与T2DM中各项临床资料、主要生化指标以及各种并发症（高血压、视网膜病变、肾病、大血管病变、周围神经病变、糖尿病足）及合并症的关系。 5.对T2DM按家族史、胰岛素治疗情况进行分组，分析探讨G6179A多态性与T2DM家族史、胰岛素治疗的关系。 6.按性别比较T2DM患者在6179A和6179G两组间的各项临床资料和主要生化检查结果以及各种并发症之间的差异。 7.统计学方法用SPSS17.0统计软件分析。计量资料各参数以均数±标准差(Mean±SD)表示，计量资料采用独立样本t检验。计数资料采用x2检验及Fisher精确概率法。 结果: 1.将糖尿病组与健康对照组各基本资料进行比较，发现糖尿病组在BMI(P＜0.001)、收缩压(P＜0.001)、舒张压(P＜0.001)、空腹血糖(P＜0.001)、血脂四项间均显著高于对照组(P＜0.05)。在T2DM患者中，男性患者253例，女性患者252例，发生G6179A变异的总变异率为4.95％(25/505)，在正常对照组中，发生G6179A变异的总变异率为3.04％(16/526)。将两组结果进行统计学比较，G6179A多态性在两组间分布无显著统计学差异(P＞0.05)。但按性别分析G6179A多态性在两组间分布差异，发现男性6179A的比例在T2DM组（占6.72％）要明显高于正常男性对照组（占2.69％），两组间分布有显著统计学差异（OR=2.601;95％CI,1.061-6.390;P=0.032）。而女性6179A的比例在两组间分布无显著统计学差异(P＞0.05)。 2.将T2DM患者分为6179A和6179G两组，分析发现两组间BMI有显著差异(P＜0.05)，6179A组患者平均BMI要明显低于6179G组。G6179A多态性变异降低了T2DM患者的BMI指数，该指数的减低符合线粒体糖尿病的特征。两组间其余各项临床资料和主要生化检查结果均无统计学差异(P＞0.05)。在糖尿病并发症的比较分析中，大血管病变并发症在6179A组中的发生率显著低于6179G组，两组间有显著差异(OR=0.338;95％CI,0.133-0.860;P=0.017)。 3.发生G6179A多态性改变的T2DM患者中，有糖尿病家族史的病人平均年龄要显著低于无家族史的病人(P＜0.05)。 4.在男性T2DM患者中:携带6179A多态性患者的发病年龄(P＜0.05)、BMI(P＜0.05)、高血压发生率(P＜0.05)、大血管病变发生率(P＜0.05)均显著低于6179G携带者。而女性T2DM患者在6179A和6179G两组间各项资料分布无明显统计学差异(P＞0.05)。 结论: 1.本研究发现6179A多态性是男性二型糖尿病发生的高风险因素;女性T2DM的发生与6197A无显著性差异。 2.尽管6179A多态性是男性二型糖尿病发生的高风险因素，但本研究仍发现该变异是二型糖尿病大血管病变并发症的保护性因素。此外，该变异可能对糖尿病周围神经病变、糖尿病足、糖尿病肾病及高血压也有一定的保护效应。这一结果也体现了线粒体DNA致病机制的复杂性。 3.G6179A多态性与家族史的分析表明:有家族遗传史，同时又携带6179A多态性的患者在发病、患病年龄上有偏低的趋势，需尽早预防。 4.男性T2DM患者中，虽然6179A携带者的发病年龄偏低，但患者的BMI指数、糖尿病高血压以及大血管病变的发生率均低于6179G携带者。表明线粒体在糖尿病发生发展中的作用机制较为复杂。