电针对先天性脑损伤仔鼠脑白质神经髓鞘修复的影响

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背景目前认为,脑白质损伤尤其是新生儿脑白质损伤是脑瘫发生的最重要的危险因素。发生脑白质损伤的患者出现脑瘫的风险可能增加15倍,脑白质损伤已成为导致新生儿伤残的重要原因。正确认识脑白质损伤带来的影响,同时深入研究并寻找修复的机制,对于降低患者的伤残率有着重要意义。针灸对于表现为中枢性姿势异常及运动障碍的小儿脑性瘫痪治疗效果显著。电针不同于传统针灸,其是在采用普通针刺法进针行针使患者得气后,对相关重要穴位进行选择,然后接上电针仪的电极并给予不同的特殊频率的电流刺激。通过毫针作用于人体经络穴位,使毫针的刺激与电的生理效应的结合以达到治疗疾病的目的,这种方法在提高了毫针的治疗效果的基础上,进一步扩大了针灸的治疗范围。目的本课题旨在探索将电针应用于宫内感染所致脑损伤仔鼠,从而探讨其对宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质神经髓鞘修复的影响和机制。为寻找修复脑白质损伤所致的新生儿非进行性脑损伤所致的综合征提供基础研究资料,并为进一步研究临床上电针对小儿脑损伤的治疗价值提供一定的借鉴意义。方法模型制备与分组:脂多糖(LPS)组孕鼠制备先天性脑损伤仔鼠模型,需在其孕第17d时连续两天进行腹腔注射LPS(450μg/kg.d);使用相同剂量的无菌生理盐水进行腹腔注射的仔鼠作为对照组。怀孕22d前即生产的仔鼠确定为早产鼠;实验组和对照组均去除早产鼠。仔鼠出生后,为判断宫内感染造模是否成功取胎盘做HE染色,可见大量中性粒细胞浸润则为感染存在且宫内感染模型成功的标志。其后依据随机原则选用生理盐水对照组仔鼠22只(n=22),LPS组仔鼠40只(n=40);LPS组仔鼠再随机分为非干预组22只(n=22)、电针组18只(n=18);在24h后对未添加干预因素的生理盐水对照组和LPS非干预组仔鼠各随机处死4只并取脑组织行病理学检测。各组仔鼠均常规饲养;电针组仔鼠常规饲喂的情况下从出生后第7d开始电针干预,纳入实验的各组仔鼠均在实验的第14d、28d分别取脑白质做病理学检测以测量脑神经髓鞘厚度。电针干预:电针组仔鼠常规饲喂至出生后第7d时开始电针干预,具体方法是参照《实验针灸学》及王风波等方法,选取四肢的足三里、曲池以及头部的百会穴,所选取穴位刺入毫针后再连接电针仪,选择频率为5-10Hz的连续电流进行刺激,刺激强度以出现四肢轻微收缩、头部轻微抖动为度,每天干预1次,每次15分钟,干预至28日龄。电镜标本及图片的制作:抽取仔鼠白质组织块后行常规电镜标本制作所需的固定和染色,包埋组织块选用球切法(isector),以此制备脑白质常规电镜标本。制作成功的组织块包埋完成后每个均随机切取厚度为60nm的超薄切片,制作完成的超薄切片再使用透射电子显微镜观察并随机选择放大20000倍的5个视野进行拍照。脑神经髓鞘厚度测量方法:参照Larsen等方法,在所摄电镜照片上随机叠加等距测试线,对每个待测有髓神经纤维髓鞘断面的内、外边界与测试线的交叉点数均进行计数。统计学处理:采用SPSS17.0统计软件对所获得数据进行统计学处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果纳入实验各组胎盘病理检查结果:生理盐水对照组孕鼠胎盘无大量中性粒细胞浸润,LPS组孕鼠胎盘存在大量中性粒细胞浸润。各组仔鼠脑组织病理改变:生理盐水对照组仔鼠脑白质胶质细胞核仁清晰,结构完整,分布有序,LPS组仔鼠脑白质胶质细胞大量聚集,同时存在明显的血管扩张、出血等。3组仔鼠脑神经髓鞘厚度体视学检测结果:第14天LPS非干预组仔鼠脑神经髓鞘平均厚度为65.4457±6.9376,LPS电针组仔鼠脑白质神经髓鞘厚度平均值为88.5768±2.6786,生理盐水对照组仔鼠脑白质神经髓鞘厚度平均值为109.7667±9.7985,LPS组所测得的神经髓鞘厚度均明显低于生理盐水对照组所测得的神经髓鞘厚度,组间差异显著(P<0.01);第28天LPS非干预组仔鼠脑白质神经髓鞘平均厚度为88.4465±5.3365,LPS电针组仔鼠脑白质神经髓鞘厚度平均值为110.5546±4.6673,均明显低于生理盐水对照组仔鼠脑白质神经髓鞘所测得的平均厚度126.5667±4.5768,组间差异显著(P<0.01);第14天和第28天LPS电针组仔鼠髓鞘厚度均低于生理盐水对照组,表明LPS所致的宫内感染可引起仔鼠髓鞘厚度明显降低;LPS电针组仔鼠髓鞘厚度平均值高于LPS非干预组(P<0.01)表明实施电针干预措施可以有效促进仔鼠髓鞘厚度的增长;各组第14d与28d组内比较,均有显著差异(P<0.01)。结论宫内感染所致仔鼠脑白质髓鞘受损致使髓鞘厚度平均值明显降低,造成这种病理改变的机制可能与宫内感染后引起炎症反应发生,而炎症反应时出现自由基毒性明显增强以及大量释放炎症因子,从而造成了神经纤维轴突断裂和少突胶质细胞的损伤等因素有关。然而电针干预显著提高先天性脑损伤所致仔鼠脑神经髓鞘厚度增加,可有效促进脑损伤仔鼠脑白质的神经髓鞘进行修复。因此,进行早期而积极的电针干预,可提高脑白质神经髓鞘平均厚度,有利于对因宫内感染诱发的一系列病理变化而损伤的脑白质神经髓鞘的修复与再生,为进一步研究临床上电针对小儿脑损伤的治疗价值提供一定的借鉴意义。
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