铁皮石斛叶片原生质体培养及离体根尖体细胞胚发生研究

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本研究论文之一是对铁皮石斛无菌试管苗的幼嫩叶片原生质体的游离及培养条件研究。结果表明原生质体分离的适宜酶液配比是0.5%Pectinase和1.0%Cellulase Onozuka R-10;酶解时间为6h;渗透压调节剂的浓度为0.5M,以蔗糖作为渗透压调节剂优于甘露醇和葡萄糖,但是此时原生质体的产量下降28.7—38.1%;在酶液中添加150mg.L-1的抗坏血酸及20mg.L-1的CaCl2可分别使原生质体的存活率提高9.2%和15.7%;在酶解之前对材料进行质壁分离处理使原生质体的产量提高了3.23%,存活率提高了4.2%。 叶肉原生质体培养,在3—5d开始第一次分裂,并能持续分裂至形成胚性细胞团。较为适宜的培养条件是附加0.5mg.L-1NAA及1.0mg.L-16-BA的MS1培养基;稍低的温度(21±0.5℃);1501x的持续光照;培养密度为5×105个.mL-1;采用液体浅层和双层培养在出现分裂时间、分裂频率等方面均优于琼脂糖包埋法和琼脂岛培养法,但液体浅层培养中细胞持续分裂较弱;暗处理24h的叶片原生质体在培养中其内含物的外溢及质膜破裂情况均明显减少,且分裂能力提高2.2%;培养基中添加50mg.L-1的抗坏血酸、5mg.L-1的CaCl2、100mg.L-1的精氨酸均使原生质体的分裂能力有所提高;但低温处理(5℃)24h的叶片,其原生质体的产量与存活率没有提高,反而有所下降,分裂能力也无明显变化。 本研究论文之二是以铁皮石斛的离体根尖为外植体,研究了在不同的培养条件下离体根尖经愈伤组织形成体细胞胚、直接产生体细胞胚及直接形成芽后再生植株。在改良B5(微量元素为原来的1/3)中加入1.0mg.L-12,4—D和3.0mg.L-16-BA对离体根尖的愈伤组织诱导较为合适,0.5mg.L-1NAA有利于从愈伤组织上产生体细胞胚;6-BA明显促进离体根尖直接产生类原球茎,而NAA则有阻碍作用;同时NAA的存在也使离体根尖直接成芽的时间延长。对其再生植株的过程进行细胞学观察后认为铁皮石斛的类原球茎是单细胞起源的真正的体细胞胚。
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