MCMV诱导鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞凋亡及其作用机制

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目的:  通过观察鼠T细胞淋巴瘤细胞株EL4细胞能否被小鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,M C M V)感染,及其感染前后EL4细胞形态的变化,及MCMV感染对EL4细胞凋亡的影响,为寻求有效的T细胞淋巴瘤治疗方法提供新的方向。  方法:  设立正常对照组、M O I=1感染组、M0I=10感染组、M01=100感染组,另外设有更昔洛韦(ganciclovir,GCV, GCV25μg/ml)组、MCMV(M0I=60)组、MCMV+GCV(M0I=60, GCV25μg/ml)组。分别以感染复数(multiplicity of infection, M O I)为1、10、100的MCMV smith株感染EL4细胞,于感染后1、3和5天收集细胞。瑞氏-吉姆萨染色后光镜下观察细胞形态;台盼蓝抗染法计数细胞存活率;实时荧光定量 PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测感染细胞内 MCMV DNA基因拷贝数;流式细胞技术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测感染细胞P53、P21、cFlip、Caspase8的mRNA表达水平;Westemblot检测Caspase8、P53、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3的蛋白表达水平。  结果:  MCMV感染后,EL4细胞体积增大,细胞核不规则,见折叠扭曲。与正常对照组相比,各感染组EL4细胞存活率降低,凋亡率增加(P<0.05),凋亡蛋白 P53、Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase3、Caspase8表达均上调,以M01=10感染组在感染后第5天最为明显。与MCMV感染组(M0I=60)比较,MCMV+GGV组EL4细胞内MCMVDNA含量降低(P<0.05),E L4细胞凋亡率及凋亡蛋白P53、Caspase8、Bax/bcl-2表达降低(P<0.05)。  结论:  鼠T细胞淋巴瘤细胞株EL4细胞可被MCMV感染,呈现出明显凋亡现象。EL4细胞在MCMV感染后凋亡蛋白P53、Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase3、Caspase8表达上调。更昔洛韦抑制EL4细胞内MCMV DNA复制,减弱MCMV对EL4细胞的杀伤作用。
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