【摘 要】
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B淋巴细胞刺激因子(BAFF),是肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员之一,能够延长小鼠B淋巴细胞的存活,在体液免疫和细胞免疫中具有重要作用。鉴于BAFF在免疫系统中的重要功能,美国FDA
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B淋巴细胞刺激因子(BAFF),是肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员之一,能够延长小鼠B淋巴细胞的存活,在体液免疫和细胞免疫中具有重要作用。鉴于BAFF在免疫系统中的重要功能,美国FDA在2000年11月正式批准重组人胞外可溶性功能区BAFF(sBAFF)进入人体Ⅰ期临床试验,治疗IgA缺陷症和普通变异免疫缺乏症(CVID)患者。很多实验表明,用作免疫佐剂配合疫苗使用的一些重组的细胞因子可以明显增加疫苗的效果,并且能够增加动物对免疫疾病的抵抗能力(如CD40L、IL-2)。细胞因子还能够克服传统药物(抗生素及化学药物)副作用大的缺点。由于BAFF能够促进B细胞分泌抗体和促进B细胞存活,BAFF应该能够和细胞因子免疫佐剂CD40L、IL-2一样拥有免疫佐剂的效果。因此,BAFF从发现至今一直是研究的重点,但是关于重要经济畜禽的sBAFF及其突变体的基因克隆、鉴定并且作为免疫佐剂的研究在国内外还是空白。在我们的实验中,为了改良猪的可溶性BAFF对小鼠B淋巴细胞的作用,我们构建了一个新的融合蛋白Fc/psBAFF(包括Fc片段和psBAFF),然后以Fc/psBAFF为模板,利用一步反向PCR扩增出Fc/psBAFF的突变体即 Fc/pmBAFF(GTCCATGTCTTTGGGGATGAACTG 被 GGGGGG 代替),在 Fc/psBAFF 和Fc/pmBAFF分别被插入pET28a载体之后,重组蛋白表达于E.coliBL21中并利用Protein A亲和层析高效纯化。最后,利用激光共聚焦、流式细胞仪和MTT法检测了两个重组蛋白的生物学活性。结果证明:Fc/psBAFF蛋白仍保留对小鼠B淋巴细胞的促存活作用,然而其突变体Fc/pmBAFF蛋白对小鼠B淋巴细胞的促存活作用效果比突变前高。
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