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人禽流感是由甲型禽流感病毒(AIV)直接感染人而引起的以呼吸道感染为主要临床表现的急性疾病,目前主要有H5N1、H7N7和H9N2亚型病毒可以感染人,其中H5N1感染人后病死率最高,超过50%。人H5N1病毒感染存在广泛的免疫功能紊乱,如:机体产生大量的促炎症因子和趋化因子,包括IL-1、TNF-α、IL-8、MCP-1、IP-10、MIG、RANTES等,在机体正常的免疫应答过程中,这些因子可以保护机体,防御外来致病物,但是在特定的环境中,免疫细胞会因过度活化而攻击正常组织,因此目前的研究推测免疫系统内细胞因子的过度反应可能与H5N1病毒的高致病性有关。呼吸道上皮细胞及单核/巨噬细胞是流感病毒感染的主要靶细胞,在病毒感染的细胞中病毒非结构蛋白NS1含量丰富,它不仅参与了机体的免疫反应调节,还在病毒复制、细胞凋亡、抑制宿主细胞蛋白翻译等过程中发挥重要作用。因此,本研究用含H5N1 NS1基因的重组质粒转染、野生病毒及重组病毒体外感染的方法,检测人上皮细胞、单核细胞来源的巨噬细胞趋化因子的表达,目的是研究我国分离的高致病性人禽流感H5N1病毒及其NS1蛋白对宿主细胞趋化因子表达的影响,进而认识禽流感病毒的致病机理,为其治疗提供理论基础。1.人禽流感H5N1病毒能诱导细胞表达IP-10,但具有病毒特异性和细胞类型特异性,A/Anhui/1/2005(H5N1)诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B释放IP-10的能力高于其它H5N1病毒,且是A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的10倍以上,这可能与禽流感H5N1亚型病毒的高致病性有关。2.单一人流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的NS1蛋白、人禽流感病毒A/Anhui/1/2005(H5N1)NS1蛋白及插入80-84位氨基酸的人禽流感病毒NS1蛋白均能下调BEAS-2B细胞内IP-10的表达(P<0.01),但三者之间下调程度无显著差异(P>0.01)。3.以A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)(简称PR8-RG)为骨架含有H5N1病毒NS基因(简称PR8-NS-RG)及插入80-84位氨基酸NS基因的重组病毒(简称PR8-mNS-RG)诱导宿主细胞释放趋化因子的表达水平有所不同,重组病毒PR8-RG感染BEAS-2B后诱导IP-10、IL-8、RANTES的表达水平明显高于PR8-NS-RG、PR8-mNS-RG和未感染组(P<0.05)。同样,重组病毒PR8-RG诱导巨噬细胞释放RANTES、MIG的表达水平明显高于PR8-NS-RG、PR8-mNS-RG和未感染组(P<0.05)。提示较人流感病毒H1N1,人禽流感H5N1病毒NS1基因明显抑制趋化因子的表达,且NS1基因80-84位氨基酸可能能增强抑制效应。人禽流感H5N1病毒体外感染能诱导趋化因子IP-10的高水平表达,转染试验和重组病毒感染试验发现,H5N1病毒的NS1基因在拮抗细胞趋化因子反应中表现了更强的抑制作用,提示除NS1蛋白外,可能有其它的病毒蛋白参与调节宿主对病毒的免疫应答,也参与了H5N1病毒感染中的高炎症。