论文部分内容阅读
研究背景子宫内膜异位症(Endometriosis，EM)是育龄期妇女常见病，最常见的症状是痛经与不孕。其病因复杂，且互相联系，互相影响。在诸多的发病学说中，Sampson的经血逆流学说是主导理论。但是逆流的子宫内膜与腹膜起始阶段相互作用的确切机制尚不清楚。到目前，已经发展了几种研究子宫内膜与腹膜之间相互作用的体内和体外模型。如有人利用狒狒、裸鼠等来观察人的子宫内膜异体种植的过程，还有人利用羊膜和人类腹膜等体外模型，但是其结论亦不一致。我们实验室建立的子宫内膜一自体腹膜体外模型，因其模拟程度高，可动态观察内膜对腹膜早期粘附、侵袭等连续过程，并可分析内异症患者与正常人在位内膜的异同等，对于研究内异症的发病机理，具有很重要的意义。经血逆流学说虽然可以解释大多数内膜异位症的发生，但是它不能解释为何内异症患者的异位内膜能够存活，而健康妇女的异位内膜就不能存活。近年来，郎景和教授总负责的课题组，对在位内膜在内异症发病中的作用进行了系统的研究，取得了一些重大的突破：发现内异症在位内膜在黏附、侵袭和血管形成等诸多方面有别于正常内膜，这种差异很可能在于基因的差异。提出了内异症发病的分子机制假说：“在位内膜决定论”，即内异症发病与否，取决于患者在位内膜的特性。另外有人提出了免疫学说，认为免疫反应的改变参与了EM的发病和发展。免疫监视的缺陷会导致对腹腔内膜碎片清除的减少，从而使其有机会粘附于腹膜，并能够在局部种植、生长。我们先前的研究认为免疫反应的改变是继发的，是在位子宫内膜本身的特点在其逆流入腹腔后造成了免疫系统的改变。研究目的1、建立子宫内膜-自体腹膜组织培养模型。并观察分析分泌期子宫内膜的早期侵袭特点和内异症患者在位内膜与正常内膜侵袭性的差异。2、从分子生物学角度分析在位内膜侵袭的特点及内异症在位内膜与正常内膜间的差异。3、研究内异症患者在位内膜能够在腹膜局部生存、种植、生长过程中的免疫机制。研究方法1．光镜下观察子宫内膜种植于自体腹膜不同时间后的侵袭差异及特点。2．免疫组化、RT-PCR和ELISA等方法研究在位内膜及培养基中MMP-3、MMP-9mRNA及蛋白的表达。3．免疫组化、RT-PCR和蛋白印迹法研究在位内膜与培养基中ENDO-1 mRNA及蛋白的表达，而ENDO-1可以改变腹腔巨噬细胞的功能，并能促进血管增生。4．免疫组化和TUNEL法观察分析内异症患者在位内膜与正常内膜增殖与凋亡的特点，并分析与Fas／FasL促凋亡系统的关系。5．研究内膜-腹膜组织培养模型培养基中sFasL的分泌。结果1．EM患者和正常妇女的在位内膜组织分别与腹膜组织离体共培养后，子宫内膜对腹膜的侵袭在EM组明显强于正常对照。2．EM患者在位内膜MMP-3、MMP-9mRNA的含量明显高于正常对照，这可能是EM患者在位内膜侵袭性强的原因之一。3．MMP-9蛋白主要定位于子宫内膜腺体细胞，EM患者的MMP-9表达量高于对照，离体与腹膜共培养后仍可以维持表达。4．子宫内膜-腹膜共培养后，上清中可检测到MMP-3的分泌，但是其分泌高峰和mRNA的上调峰值相比是延迟的。5．无论是在蛋白质水平还是mRNA水平，EM患者分泌期内膜ENDO-1的表达均明显高于对照组。6．EM患者在位子宫内膜-自体腹膜培养后，培养上清中可以检测到ENDO-1的分泌，EM组明显高于对照组。7．EM患者的分泌期在位内膜凋亡敏感性是降低的，Fas mRNA和蛋白在EM患者在位子宫内膜的表达与对照组相比并没有显著性差异。故凋亡敏感性的降低可能是Fas的胞内传导通路有障碍或存在Fas的调控因子。8．EM患者分泌期在位内膜细胞中FasL mRNA和蛋白和正常对照相比是明显升高的，其产生的有活性的sFasL可能是异位的内膜造成免疫耐受的重要原因。9．EM患者分泌期在位内膜的增殖活性和正常对照相比并没有显著性差异，这和EM的良性疾患的性质相符。结论1．子宫内膜-腹膜共培养组织模型是研究子宫内膜异位症发病早期侵袭过程的良好模型。2．内异症患者在位内膜与正常内膜的侵袭潜力有很大差异，分子生物学研究显示，二者的MMP表达量及特点有显著差异。3．内异症在位内膜的增殖能力与对照相比没有差异，但抗凋亡能力增强，促凋亡的Fas／FasL系统在内异症在位内膜的功能与正常不同。4．内异症在位内膜与腹膜共培养后，分泌的sFasL明显多于对照。5．内异症患者在位内膜侵袭能力增强，抗凋亡能力增强，又一次证明在位内膜的生物学特性在内异症发生中的决定性作用。