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牙鲆Olive flounder(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水经济养殖品种,具有极高的营养价值和经济价值。牙鲆在养殖过程中雌性生长速度显著高于雄性,生产中,人们希望降低雄性的比例获得更高的经济效益。温度是影响鱼类性别分化重要的环境因子之一。高温可以导致鲆鲽类雄性比例显著增多,甚至达到100%雄性。因此研究温度对牙鲆性别分化的影响及其内在的机制对于丰富鱼类性别分化理论、完善鱼类生殖发育调控机制具有重要的意义。本研究克隆了牙鲆生殖细胞标记基因dnd并研究了其在胚胎发育和配子发生过程中的表达模式;克隆了基质细胞衍生因子sdf-1和趋化因子cxcr4,并研究了其在胚胎发育过程中的表达模式,比较了在不同温度处理条件下,其表达量的变化;比较了XX牙鲆在雄激素(17α-甲基睾酮)和高温(28℃)处理条件下,诱导率情况,全长情况,生殖细胞形态、数量增殖变化,生殖细胞标记基因(dnd)和雄性高表达基因(amh)在性分化过程中的表达量变化;比较了高温处理条件下,性分化过程中,抗缪勒氏管激素、雌二醇、睾酮和甲状腺激素的含量变化。主要研究结果如下:1)牙鲆生殖质是母源性的,Podnd基因能够用于标记PGCs在胚胎发育过程中的发生迁移模式;牙鲆PGCs起源和迁移模式和斑马鱼、大菱鲆相似;2)雄激素(17α-甲基睾酮),高温(28℃)在幼鱼全长1.2-1.3cm之间进行处理,均可以诱导XX牙鲆幼鱼雄性化:XX牙鲆雌性率为94.44%;雄激素处理,诱导率达到92.31%,同时显著抑制了幼鱼的生长;而高温在诱导雄性化的过程中,诱导率达到95.24%,较对照组而言,全长无显著性差异;3)牙鲆sdf-1和cxcr4主要在原肠期和体节期表达,符合PGCs迁移运动发生的时期特点,且在不同温度处理下,上述两个因子的表达量有显著变化,可能参与了其迁移调控的过程;4)在性分化过程中,未分化的性腺朝着雌性和雄性分化时,生殖细胞的数量和增殖方式呈现二态性,朝着雌性分化的群体生殖细胞数量显著高于雄性。同时,雄性的凋亡显著高于雌性,且雄性的凋亡呈现片状带型特征,雌性是点状零散型的特征,可能凋亡特点的不同参与了生殖细胞数量的差异;5)在性分化过程中,生殖细胞标记基因dnd,雄性高表达基因amh呈现出明显的性别二态性,雌性主导群体的dnd表达量显著高于雄性主导群体,同时,雌性主导群体的amh表达量显著低于雄性主导群体。