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肾间质纤维化是各种原发性和继发性肾脏病发展至终末期肾脏病(ESRD)最终途径和病理基础,肾脏病的预后往往取决于肾小管间质的损害,肾间质纤维化程度决定了慢性肾脏病(CKD)发展的快慢和预后。病理状态下衰老相关基因Sirt1与肾脏固有细胞的转分化、凋亡,进而导致肾小球硬化和间质纤维化有密切关系。近年来越来越多的体内外研究证明Sirt1具有明确的肾脏保护作用,Sirt1通过调节肾脏细胞对不同的应激原(氧化应激、基因毒性和缺氧)的反应来提高细胞的存活率,而且能够提高肾脏对外界损伤的自身保护能力,从而显著延缓肾间质纤维化过程。中药蝉花的有效成份与冬虫夏草相似,属优质虫草,且其味甘咸性寒异于甘温之虫草,具有滋阴清热、软坚散结、熄风通络之功效,研究表明蝉花既有抗衰老作用,又能延缓肾小球硬化和肾间质纤维化,能够延缓肾功能衰竭的进程。本课题提出了“蝉花通过调控Sirt1及其下游通路,抑制肾脏固有细胞凋亡及转分化,从而发挥其延缓肾间质纤维化的作用”的假说。拟以大鼠肾小管上皮细胞为研究对象,从体外实验探讨蝉花延缓肾间质纤维化的作用机制。目的:探讨蝉花菌丝对AngⅡ作用下肾小管上皮细胞(NRK)Sirt1及其下游分子的蛋白及m-RNA表达,大鼠肾小管上皮细胞细胞凋亡率的影响,揭示蝉花菌丝延缓肾间质纤维化的作用机制。方法:以AngⅡ刺激下的NRK细胞为研究对象,采用血清药理学研究方法和western-blot、RT-PCR、免疫组化、细胞染色等技术,观察空白对照组、AngⅡ对照组、氯沙坦组、白藜芦醇组和蝉花高、中、低剂量组的Sirt1及其下游分子smad7、smad3、p53蛋白及m-RNA表达。同时观察各组NRK细胞凋亡的情况,采用SPSS20.0统计软件处理,组间差异采用单因素方差分析进行统计分析。结果:①各组NRK细胞Sirt1及其下游分子蛋白及m-RNA表达:与空白组比较,AngⅡ组的NRK对Sirt1、smad7蛋白及m-RNA表达显著下调(p<0.01);smad3、p53蛋白及m-RNA表达明显上调(p<0.01);与Ang Ⅱ对照组比较,蝉花不同剂量组、氯沙坦组、白藜芦醇组能够上调NRK对Sirt1、smad7蛋白及m-RNA的表达(p<0.01),下调NRK对smad3、p53蛋白及m-RNA表达(p<0.01)。其中蝉花高剂量组药效果优于氯沙坦组(p<0.01);蝉花不同剂量组之间存在量效相关关系。②NRK凋亡:与空白组对照,AngⅡ组NRK凋亡率明显升高(p<0.01),与AngⅡ对照组对照,蝉花各剂量组均能显著降低NRK的凋亡率(p<0.01),不同剂量的蝉花组之间存在量效相关关系。结论:通过本研究可以证实中药蝉花菌丝可以通过上调Ang Ⅱ作用下NRK的Sirt1、smad7蛋白及m-RNA表达和下调smad3、p53蛋白及m-RNA表达,抑制NRK凋亡,以上实验结果提示中药蝉花在一定程度上可以发挥抗肾小管间质纤维化的作用。