【摘 要】
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该文通过过量表达大肠杆菌分子伴侣SecB和GroEL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响.通过酶活性的测定及Western印迹分析,分别在tac,T7及氧调控表达系统中研究ASP和WTSP
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该文通过过量表达大肠杆菌分子伴侣SecB和GroEL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响.通过酶活性的测定及Western印迹分析,分别在tac,T7及氧调控表达系统中研究ASP和WTSP对PAC分泌的影响.运用PCR方法从磷酸乙酰转移酶(Pta)-乙酸激酶(Ack)代谢途径缺失菌株E.coli PAl染色体上扩增出天冬氨酸激酶-I-高丝氨酸脱氢酶-I和高丝氨酸激酶基因部分序列,构建了整合型重组质粒pVHb-Han,应用染色体-质粒同源重组的方法将透明颤菌血蛋白整合到大肠杆菌PAl染色体上的thr操纵子,经表型筛选,鉴定PCR,苏氨酸营养缺陷型,western印迹和活性分析,筛选到新型整合工程菌G830.构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒pSC-Lys(pSC101复制子)和p15A-Lys(p15A复制子),质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统,该系统可以与高拷贝复制子(如pMBl,ColE1)的重组蛋白表达质粒兼容.
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