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背景：基因治疗是近十多年来治疗恶性肿瘤的一种新方法，虽然目前主要处于实验研究阶段，但已取得一些令人鼓舞的结果。九十年代以来，核因子κB(NF-κB，nuclear factor kappa B)及其抑制因子Ⅰ κ B α一直是肿瘤基因治疗研究的热点。NF-κ B是指Rel家族中的p50／p65异源二聚体，在细胞内主要起核转录因子作用使细胞保持存活。NF-κ B存在于哺乳动物几乎所有类型的细胞中，在肿瘤细胞内，它的激活调控着各种癌基因的表达，参与肿瘤的增殖、侵袭和转移。研究发现，各种肿瘤细胞内NF-κ B均不同程度的呈激活状态。尽管肿瘤的病因、发病机制各不相同，且尚未阐明，但实验性抑制肿瘤细胞内NF-κ B活性，确能抑制肿瘤生长，显示出肿瘤治疗新进展的可喜苗头。NF-κ B核因子的活性通常由其抑制基因Ⅰ κ B α调控。当它与NF-κ B结合时就将NF-κ B锚定在胞浆内，使其丧失入核发挥调控各种靶基因的作用，这时NF-κ B暂时失活。国外已有报道，研究用体外突变型Ⅰ κ B α(mⅠ κ B α)通过腺病毒载体转染肝癌细胞，使其牢固而持续地与NF-κ B结合，可抑制该细胞内增高的NF-κB活性，使肿瘤细胞凋亡，通常此过程尚有p53基因参与。人体各种肿瘤细胞内NF-κ B均呈不同程度的激活状态，同时它受其抑制因子Ⅰ κ B α调控。细胞未受刺激时，Ⅰ κ B α与NF-κ B结合将它锚定在细胞浆呈非激活状态，一旦受到致癌物、促癌剂、电离辐射、细胞因子、化学药物等刺激，刺激信号通过各种信号转导途径使Ⅰ κ B α降解，NF-κ B游离激活并转位至细胞核中发挥其对靶细胞基因的调控转录作用，促使肿瘤细胞增殖。突变型Ⅰ κ B α(mⅠ κ B α)是Ⅰ κ B α的突变体，它较Ⅰ κ B α更为稳定，当其与NF一KB结合后，可形成稳定的二聚体。因此，目前国内外研究的重点是希望抑制肿瘤细胞内NF一KB的活性，以抑制肿瘤细胞的生长。 原发性肝癌是全球10种最常见的恶性肿瘤之一，在我国也很常见。肿瘤的病死率占各病之首，而肝癌占肿瘤死亡率的第三位。肝癌有别于其他肿瘤，它具有门静脉侵袭的特点，当发现时往往已出现转移，因此极具威胁性。常用的治疗手段为手术、放疗和化疗。因不易早期发现，手术适应证少。肝癌主要为腺癌，对放、化均不敏感。因此急需寻找新的治疗措施，以提高疗效。 关于1 KB基因治疗与放射治疗肿瘤的辐射增敏作用的提出，是因为近年实验研究发现:抑制肿瘤细胞内NF一KB活性，可增强肝癌细胞对放、化疗的敏感性。在肿瘤单纯放疗的过程中，也会出现对放射治疗的抵抗。在20世纪90年代学者们提出了是否肿瘤对辐射的拮抗可通过抑制肿瘤细胞内NF一KB活性来改变。有学者用ml KB转染对辐射抗拒的神经胶质瘤细胞，结果肿瘤细胞内1 K BQ表达的肿瘤细胞内NF一KB活性受性抑制。提示肿瘤细胞内的NF一KB活性是一个放射敏感性的内在因素。本研究用nil K Ba转染肝癌细胞，观察肝癌细胞存活情况，探讨它对放射敏感性的影响及机制。目的: 探讨突变型工KB。(ml KB。)对肝癌细胞HePGZ的抑制作用及对放射治疗的增敏作用，初步探讨其效应的分子生物学基础。为探索新的基因治疗方法提供实验依据。方法及结果: 实验一、应用酶切及PCR方法证实了实验用突变型工K Ba(ml K Ba)的可靠性，将ml K Ba基因与AdEasy系统构建细菌内同源重组腺病毒载体，经293细胞包装，产生含ml K Ba基因的载体腺病毒，以此腺病毒感染培养的肝癌H即G2细胞株，当细胞内出现绿色荧光蛋白(GFP)表示成功感染后，提取细胞浆行ml K Ba表达蛋白Western blot分析，检测到外源ml K Ba蛋白表达。 实验二、应用平板集落实验、软琼脂细胞培养、细胞生长曲线，观察含外源m工K Ba基因的H即G2细胞株的生长状况，发现外源ml K Ba基因可以明显抑制H即G2细胞生长。细胞凋亡原位末端标记检测(TUNEL染色) 一4-显示含外源ml K Ba基因的H即GZ细胞呈强阳性。 实验三、细胞分为三组:1.转染ml K Ba肝癌细胞(HeP GZ/Ad一rnI虑a组);2.转染空载体肝癌细胞(H即G2/Adv组);3.亲本细胞H印G2组。经高能X射线照射，比较各组不同剂量照射后细胞集落形成率，实验数据用“L一Q模型”拟合绘制细胞存活曲线，得到辐射增敏比为3.2。 各组细胞经6Gy高能X射线照射，细胞凋亡原位末端标记检测(TtJNEL染色)，转染ml‘Ba肝癌细胞(H eP GZ/Ad一nil沼a组)照射前凋亡率为18.2%，照射后68.3%，照射前与照射后凋亡率比较差异有非常显著性勿<0 .01)。转染空载体肝癌细胞(H印GZ/Adv组)照射前细胞凋亡率为1.4%，照射后细胞凋亡率为n.7%。照射前后比较差异有非常显著性(P<0.0l)。肝癌细胞组(HeP GZ组)照射前细胞凋亡率为1 .6%，照射后细胞凋亡率为8.9%，照射前后比较细胞凋亡率差异有非常显著性(p<0.01)。照射后细胞凋亡率比较:H叩GZ/Ad一而沼a组(68.3%)与Hep GZ组(8.91%)、HeP GZ/Ady组(1 1.73%)比较，差异有非常显著性(P<0.01)。HePGZ组(8 .91%)与HeP GZ/Adv组(l 1 .73%)比较凋亡率差异无显著性(P>0.05)。 蛋白印迹分析检测: