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肺炎克雷伯菌是临床最为常见的条件致病菌之一，可引起包括血流、泌尿系统、呼吸系统以及其他无菌部位（如腹腔、胸腔、关节等）的感染。随着各类抗菌药物的不断开发及其在抗感染治疗中的应用，肺炎克雷伯菌对临床常用抗菌药物也呈现出相当程度的耐药性。其中，碳青霉烯类药物为目前最为有效的用于治疗革兰阴性杆菌引起各类感染的抗菌药物。肺炎克雷伯菌可通过产ESBLs或者ApmC酶与膜孔蛋白缺失共同作用而表现出对碳青霉烯类抗菌药物耐药或敏感性下降。1996年，一种新型的β-内酰胺酶在美国被发现。该酶能够水解包括亚胺培南在内的各种碳青霉烯类抗菌药物。因该酶首次从肺炎克雷伯菌中本检出，因而命名为肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）。此后，产KPC肺炎克雷伯菌在美洲和欧洲广泛流行，在亚洲却鲜有报道。本研究围绕产KPC肺炎克雷伯菌在我院的一次爆发流行，对该此爆发流行中的病例以及引起爆发流行的病原菌的相关信息进行了广泛而深入的研究，全面揭示产KPC肺炎克雷伯菌引起爆发流行的分子流行病学特征及其与耐药性相关的各种表型和基因型特征，为防控此类感染的再次发生提供有效依据。本研究主要涉及以下内容：一、产KPC肺炎克雷伯菌爆发流行整体情况描述与分析。工作内容包括从各种临床标本中分离和鉴定产KPC肺炎克雷伯菌、检出产KPC肺炎克雷伯菌病例资料的收集与整理等。自2009年2月到2012年6月，自44名患者的不同标本中分离出48株产KPC-2的非重复肺炎克雷伯菌菌株。其中，25株(52%)来自痰标本、2株来自胆汁、3株来自静脉插管、8株来自血流、3株来自引流液、7株来自尿液。携带产KPC-2肺炎克雷伯菌的44名患者主要来自三个病房，其中有两个是内科的ICU，另一个是外科病房。2009年2月到2011年11月，在我院仅有散发的产KPC-2肺炎克雷伯菌病例被检出。在2011年11月到2012年6月间，则呈现出爆发流行的趋势。在上述44例患者中，12名（27%）死亡，根据患者的死亡诊断，产KPC-2肺炎克雷伯菌所引起的各种部位的感染均为这些患者死亡的原因之一。此外，68%携带产KPC-2肺炎克雷伯菌的患者则表现为好转。二、产KPC肺炎克雷伯菌同源性及分子流行病学研究。采用PFGE和MLST方法对产KPC肺炎克雷伯菌分别进行同源性和分子流行病学分析。经PFGE分析，48株产KPC-2肺炎克雷伯菌可分为5个群（Cluster），分别命名为A至E。其中，A群中有4各型（A1到A4），其他群内只有一个型。在爆发流行期间，A1、A2、A3型菌株在三个病房内均有流行；A4、B、C、D和E型菌株以散发形式出现。经MLST分析，A1、A2、A3、A4和C型菌株属于ST11，B型菌株属于ST37，D和E型菌株分别属于ST395和ST392。三、产KPC肺炎克雷伯菌耐药表型与基因型分析。使用E-test方法测定病原菌对临床常用抗菌药物的敏感性；采用PCR扩增及扩增产物测序等方法分析病原菌所携带的各类耐药基因。所有临床分离的产KPC-2肺炎克雷伯菌对三代和四代头孢菌素（头孢噻肟和头孢吡肟）以及碳青霉烯类抗菌药物（亚胺培南、美罗培南和厄他培南）均表现为耐药。A2、A3和C型菌株还表现出对氨基糖苷类药物（阿米卡星）的高水平耐药。多数菌株还表现出对氟喹诺酮类药物（左氧氟沙星）耐药。四、携带blaKPC基因质粒分析。通过接合实验、S1-PFGE、Southern blot杂交等方法分析携带blaKPC-2基因质粒的各种特征。经反复试验，仅A1和B型菌株能够通过接合实验将携带blaKPC-2基因的质粒传统给受体菌。经E-test方法测定，A1和B型菌株的接合子仅表现出对碳青霉烯类药物的敏感性下降而非耐药。经S1-PFGE和Southern blot杂交分析，在不同型别的临床分离菌株中，blaKPC-2基因分别位于大小不同的质粒上（30kb至220kb）。其中，A4型菌株携带有两种含blaKPC-2基因的质粒（50kb和120kb）。五、与blaKPC基因移动相关的基因组件分析。采用PCR扩增及扩增产物测序等方法对与blaKPC-2基因移动相关的基因组件进行分析。本研究中，与blaKPC-2基因相关的基因组件与前期国内的一些其他菌株类似。blaKPC-2基因整合于一种以Tn3整合子为基础的整合子结构当中，还包含了Tn4401整合子的部分结构。各基因在结构中的顺序为Tn3转座酶、Tn3解离酶、ISKpn8、blaKPC-2基因、类ISKpn6组件。在B型和E型菌株中，在ISKpn8和blaKPC-2基因间还插入了大小分别为321bp and259bp的blaTEM基因部分序列。结论：1.本研究中，产KPC肺炎克雷伯菌呈克隆传播，表明医院感染控制措施有待加强；2.携带产KPC肺炎克雷伯菌的患者大多预后良好，即便引起血流和其他无菌部位感染，仍有相当比例的患者在治疗后好转；3. ST11菌株为此次爆发流行的主要菌株；4.首次发现ST392和ST395型产KPC-2肺炎克雷伯菌；5.以Tn3整合子为基础的整合子结构在blaKPC-2基因的传递过程中可能发挥重要作用，菌株间质粒的传播在临床分离菌株中并不常见。