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将已构建好的重组的原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11转化到大肠杆菌DH5α中进行诱导表达，将表达的基质金属蛋白酶-11(matrixmetalloproteinase11，MMP-11)蛋白纯化后免疫雌性新西兰兔，制备抗MMP-11蛋白的多克隆抗体。通过免疫印迹(Westernblot)技术验证抗MMP-11蛋白多克隆抗体的特异性，用ELISA方法测定抗MMP-11蛋白多克隆抗体的效价。进而通过免疫组织化学染色方法探讨该抗体区分月经血与外周血的可行性。以期为建立用MMP-11抗体快速、准确检测月经血的免疫学方法提供建设性意见。解决法医学实践中月经血鉴定困难的现实问题，对于保护妇女权益及维护社会稳定等都具有极其重要的社会现实意义。
一、MMP-11蛋白的表达本试验首先制备感受态大肠杆菌DH5α，将pGEX-5X-3/MMP-11转入感受态DH5α中，用含氨苄青霉素的LB培养液培养，挑选阳性克隆，用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切法鉴定，获得的质粒DNA含MMP-11基因片段。接着通过对不同异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)浓度(0.3mmol/L、0.6mmol/L、1.0mmol/L)、不同诱导时间(1h、2h、3h、4h、7h)和不同诱导温度(30℃、37℃)下蛋白量表达的研究，选择实验的最佳诱导条件为30℃诱导4h，IPTG浓度为1.0mmol/L。最后将诱导表达的融合蛋白与标准抗MMP-11单克隆抗体进行Westernblot分析，结果表明融合蛋白具有MMP-11抗原的特异性，分子量为45.5KD，符合预期结果。
二、抗MMP-11抗体制备将含有目的融合蛋白的菌液经SDS-PAGE电泳，割取目的条带，分别使用研磨后加佐剂免疫兔和直接免疫兔两种方法，免疫5次后采集抗血清，经饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体，用ELISA间接法测定抗血清效价达1∶12800。免疫印迹技术检测结果表明两种免疫方法都可以获得特异性抗MMP-11抗体。
三、月经血检测初探取2名健康志愿者月经周期第一、第二天月经血及其静脉血涂片，用自制抗血清作为第一抗体，生物素标记羊抗兔IgG为第二抗体，经免疫组化染色表明，MMP-11蛋白存在于间质细胞及子宫内膜上皮细胞内；静脉血涂片未见有MMP-11染色。1例子宫内膜组织切片检测结果可知，除了间质细胞中可见MMP-11颗粒外，腺上皮细胞内也富集了大量MMP-11蛋白颗粒。说明自制抗体能有效的检测MMP-11，从而区分月经血和静脉血。
结论：从已构建的重组原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11中，成功获得了45.5kD的GST-MMP-11融合蛋白；将纯化的GST-MMP-11蛋白免疫雌性新西兰兔，成功获得兔抗MMP-11多克隆抗体，效价达1∶12800以上；经月经血涂片和子宫内膜组织切片的免疫组化分析结果表明，自制的多克隆抗体具有较强的组织特异性。