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高效液相色谱(HPLC)可分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质,因此,其被广泛应用于生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各个领域。高效液相色谱仪主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成,较为重要的是色谱柱和检测器两个部分,按色谱分离模式来分,色谱柱大致可分为正相、反相、离子交换、疏水作用、体积排除、亲和以及手性等类型的色谱柱,本文主要应用的色谱柱类型为反相色谱柱。常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种类型,本实验采用的检测器为荧光检测器。近年来,由于共振瑞利散射方法具有高灵敏度,操作简单,检测速度快等诸多优点而备受众多研究者的关注,但众所周知的是,其选择性较差,相反,高效液相色谱的选择性较好,但分析的灵敏度与共振瑞利散射方法相比稍低。因此,高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术集各自的优势而避开各自的缺点,从而实现了将高选择性与高灵敏度融于一体的目标,相互促进并将其深入发展。本论文主要研究了三个体系,分别如下所示:1.高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定三种苯并咪唑驱肠虫剂以及三种药与曙红Y反应的机理研究此体系研究发展了一种具有新颖性,高选择性,高灵敏度等诸多优点的测量方法,即高效液相色谱与共振瑞利散射联用(HPLC-RRS)方法,并首次将其用于同时检测三种苯并咪唑驱肠虫剂,包括甲苯达唑(MBZ),阿苯达唑(ABZ)和芬苯达唑(FBZ),在pH为3.5-3.7的BR缓冲溶液的条件下,用HPLC将三种苯并咪唑驱肠虫剂的标准样品混合物或者加标样品完全分离,然后依次与探针曙红Y(EY)相互反应形成1∶1的离子缔合物,从而使共振瑞利散射信号增强,最大峰均位于335nm。共振瑞利散射信号增强的强度在各自的线性范围内与各自的浓度成正比,其线性范围为:甲苯达唑0.2-25μg·mL-1,阿苯达唑0.2-23μg·mL-1,芬苯达唑0.15-20μg·mL-1,检出限为0.064-0.16μg·m L-1。此外,通过尿液加标回收实验验证了此联用方法的可靠性。2.高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定环境水样中的依诺沙星、氧氟沙星和洛美沙星以及三种药与赤藓红探针反应的机理研究本实验建立了一种新颖,灵敏度高且选择性好的高效液相色谱与共振瑞利散射联用的测量方法,并将此技术首次用于同时测定三种氟喹诺酮类药物(FQS),包括依诺沙星(ENO),氧氟沙星(OFLX)和洛美沙星(LMLX)。在pH值为4.4的BR缓冲溶液介质中,依诺沙星,氧氟沙星和洛美沙星被高效液相色谱分离,质子化后,逐个与赤藓红(ERY)反应形成1:1的离子缔合物,形成离子缔合物后共振瑞利散射的信号显著增强,最大共振瑞利散射峰的波长均位于330nm。当信噪比为3的时候,依诺沙星,氧氟沙星和洛美沙星的检出限分别为5.1ng·mL-1,3.1ng·mL-1和4.2ng·m L-1。在本体系中,详细研究讨论了最佳实验条件的选择和反应机理。此联用技术被成功地应用于同步检测环境水样中的依诺沙星,氧氟沙星和洛美沙星,结果甚为满意。3.高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定环境水样中的加替沙星和司帕沙星加替沙星(GFLX)和司帕沙星(SPLX)经反相色谱柱完全分离后,与pH为4.4的BR缓冲溶液混合,质子化后再与本实验所用探针赤藓红(ERY)相互反应形成1:1的离子缔合物,从而使共振瑞利散射信号显著增强,在此实验步骤和原理的基础之上,本论文发展了高效液相色谱与共振瑞利散射联用的方法,并将此技术用于同时检测环境水样中的加替沙星和司帕沙星。本实验中分离的高效液相色谱流速为0.4m L·min-1,柱温为40℃,所有标准溶液及待测物进样体积均为20μL,为了提高检测的灵敏度,本实验还优化了多个柱后反应条件,例如:反应温度,反应管长,BR缓冲溶液的流速,赤藓红的流速,检测波长等。此外,采用工作曲线法和等摩尔连续变化法探讨了离子缔合物的组成比,计算出各个反应物的分布分数以便讨论反应机理,并进一步研究了共振瑞利散射增强的原因。加替沙星和司帕沙星的最大共振瑞利散射峰波长均位于330nm,当信噪比为3的时候,加替沙星和司帕沙星的检出限分别为3.8ng·mL-1,17.5ng·mL-1。最后,将此方法用于环境水样中加替沙星和司帕沙星的检测,结果甚为满意。