【摘 要】
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根据胞壁质酶R2的N端氨基酸序列及已知的链霉菌胞壁质酶基因序列设计引物,PCR扩增得到了R2酶成熟肽编码基因.将扩增产物与pMD18-T载体连接,成功构建了重组质粒pMD18-T-R2,经
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根据胞壁质酶R2的N端氨基酸序列及已知的链霉菌胞壁质酶基因序列设计引物,PCR扩增得到了R2酶成熟肽编码基因.将扩增产物与pMD18-T载体连接,成功构建了重组质粒pMD18-T-R2,经过双酶切及PCR分析,证明克隆到pMD18-T载体上的外源基因即胞壁质酶R2基因.核苷酸序列测定表明,R2酶基因由655个碱基组成,编码由217个氨基酸组成的R2酶成熟肽部分,与已报道的M1酶(球孢链霉菌ATCC No.21553)及Cellosyl(天蓝色链霉菌Mǚller)有4个氨基酸的差别.通过Antheprot蛋白质分析软件对胞壁质酶R2的二级结构与疏水性进行了分析,通过同源模建的方法构建了蛋白的三维结构图.对包括R2酶在内的81个物种的胞壁质酶进行了氨基酸序列比较,分析了胞壁质酶R2在自然界胞壁质酶系中的进化地位.将重组质粒pMD18-T-R2上的胞壁质酶R2基因成功克隆到了表达载体pET21-a(+)上,并将之转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,得到了转胞壁质酶基因工程菌,提取重组质粒对其进行了双酶切及PCR分析.
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