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背景：人β-防御素(HumanBetaDefensins,HBD)在黏膜及皮肤上皮的固有免疫中占据重要地位,同时具有广谱的抗菌活性,从而成为抗感染临床研究中的热点。 目的：研究原代培养人牙龈及皮肤角质形成细胞在梯度浓度IL-1β,TNF-α的诱导下,HBD-1,2,3及TLR2,4(Toll-likereceptors,TLRs)的表达水平,为黏膜抗感染免疫提供理论依据。 方法：牙龈黏膜标本取自我院口腔颌面外科行智齿拔除或开窗助萌术的患者,皮肤标本取自我院泌尿外科行包皮切除术的患者,所有标本来源的患者均为30岁以下,无系统性疾病。标本采用消化法获取角质形成细胞进行原代培养,并采用梯度浓度的IL-1β(0.1ng/ml,10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,150ng/ml)以及TNF-α(10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml,150ng/ml,200ng/ml)进行诱导,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测HBD-1,2,3及TLR2,4的基因表达水平。 结果：①牙龈角质形成细胞:TNF-α刺激后,HBD-1,2,3,TLR2的表达量均呈现升高趋势,HBD-1,2,TLR2均在10ng/ml处出现峰值,HBD-3在100ng/ml时达到峰值。而TLR4无统计学差异。另外IL-1β诱导后,HBD-1,3出现下降趋势,HBD-2有升高趋势,TLR2,4无统计学差异。②皮肤角质形成细胞:TNF-α对上皮细胞HBD-1,HBD-2及HBD-3的基因表达均有明显诱导作用,且在150ng/ml时达到最大效应(P<0.05),相对于对照组均出现明显的升高,TNF-α诱导上皮细胞后,TLR2,4的表达规律类似于HBDs,均在150ng/ml处出现峰值,前者为200多倍于对照组,后者为60多倍于对照组。在IL-1β的刺激下,上皮细胞内HBD-1,3及TLR2均呈现降低趋势,HBD-2的表达量无统计学意义的变化,而TLR4的表达量呈现升高趋势(P<0.005),在100ng/ml处达最大效应,约为空白对照组的20多倍(P<0.005),在150ng/ml时又开始降低。可见,人牙龈上皮细胞对炎症因子的敏感度要明显高于人皮肤上皮细胞,但从炎症因子的诱导强度来看,前者要低于后者。 结论：TNF-α对体外培养的牙龈及皮肤角质形成细胞均有显著的免疫诱导效应。IL-1β有一定的免疫诱导效应,但明显弱于TNF-α。该研究确立了TNF-α可诱导内源性HBD表达的特性,为内源性HBD替代传统抗生素的应用奠定了基础,有着较好的临床指导意义及应用前景。