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小反刍兽疫病毒(PPRV)属于麻疹病毒属(Morbillivirus),是引起山羊和绵羊等小反刍动物急性传染病的病原,该病特点是高发病率和高死亡率,被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告动物传染病,我国将其列为I类动物疫病。最初,PPRV仅在山羊和绵羊上有报道,但近几年病毒种间传播的病例被不断出现。尽管该病毒只有一个血清型,但有四个基因型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),具有区域性分布的特点,目前该病主要分布于非洲和亚洲,正威胁欧洲。HN和F蛋白是镶嵌在病毒囊膜上的糖蛋白,HN蛋白能够与淋巴细胞上的SLAM受体相互作用介导病毒入侵,这可能是导致机体免疫抑制的主要原因。在病毒侵入过程中,F蛋白能够起到融合细胞膜和病毒囊膜的作用。另外,PPRV能引起机体强烈的细胞免疫和体液免疫应答,而HN和F蛋白则是主要的保护性抗原。本研究希望筛选出HN和F蛋白的B细胞抗原表位,进而设计小反刍兽疫多表位疫苗候选抗原。利用本实验室构建的pET21a-rPPRV-HN-F质粒,经过转化、诱导表达和纯化获得了rPPRV-HN-F蛋白;经过反应原性检测,发现rPPRV-HN-F蛋白与羊源PPRV阳性血清具有明显的反应原性,用该蛋白制备了与PPRV具有良好反应原性的单克隆抗体和多克隆抗体。同时,提取了PPRVVeroE6细胞毒培养基中的糖蛋白(PPRV-Glycoprotein),制备了小鼠多克隆抗体,经过反应原性和特异性检测发现效果良好。对China/Tib/07株和Nigeria 75/1毒株HN蛋白与羊SLAM受体复合物结构进行模拟,确定了相互作用的关键氨基酸。结合模拟的结构,利用免疫信息学工具对HN和F蛋白的B细胞表位进行了预测。将人工合成的表位肽包被在氨基化酶标板上,用间接ELISA方法检测了表位肽与PPRV特异性抗体的反应原性,发现了一批共11条具有反应原性的表位肽。将筛选的具有反应原性的部分表位肽串联,经过生物合成获得了一定纯度的多表位抗原。免疫小鼠检测了抗体水平和T淋巴细胞增殖情况,发现多表位抗原能使小鼠产生特异性的抗体。流式细胞术检测发现CD3~+CD4~+T淋巴细胞和CD3~+CD8~+T淋巴细胞有不同程度的升高,尤其是CD3~+CD8~+T淋巴细胞。本研究为小反刍兽疫表位疫苗研制奠定基础,对小反刍兽疫的预防与控制,甚至对全球消灭计划的实施都具有重大意义。