【摘 要】
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目的:探讨NADPH氧化酶(NOXs)在小鼠碱烧伤模型中的作用。方法:将6-8周的C57小鼠右眼建立碱烧伤模型。免疫荧光用于观察NOXs在人碱烧伤角膜以及小鼠碱烧伤角膜的表达情况。免
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目的:探讨NADPH氧化酶(NOXs)在小鼠碱烧伤模型中的作用。方法:将6-8周的C57小鼠右眼建立碱烧伤模型。免疫荧光用于观察NOXs在人碱烧伤角膜以及小鼠碱烧伤角膜的表达情况。免疫印迹和实时荧光PCR法用于检测NOXs在小鼠碱烧伤模型中的表达情况。小鼠动物模型分为4组:左眼作为正常对照组、实验对照组(PBS组)、DPI给药组、APO给药组。裂隙灯下观察3天、7天、14天各组小鼠碱烧伤后角膜的新生血管生长情况。碱烧伤后7天应用免疫荧光法检测各组3-NT(3-硝基络氨酸)、CD11b的蛋白表达情况,免疫印迹法检测各组3-NT的蛋白表达情况,实时荧光PCR法检测各组炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6),血管生长因子(VEGF,VEGFR1,VEGFR2)表达情况。CellROX试剂用于ROS的含量检测。碱烧伤后14天应用荧光素钠造影观察新生管的变化情况。结果:免疫荧光结果显示在角膜碱烧伤中NOX2和NOX4表达量明显升高。免疫印迹法以及荧光定量PCR检测结果显示,与正常组相比,碱烧伤组Nox2、Nox4蛋白以及mRNA水平明显增加。NADPH氧化酶抑制剂应用后,免疫荧光染色检测显示:DPI以及Apo可以显著减少碱烧伤后CD11b的表达升高。荧光定量PCR检测结果显示,炎症因子IL-1β和IL-6的mRNA表达水平在碱烧伤中显著高于正常角膜中,DPI以及APO可以显著地降低IL-1β和IL-6的mRNA表达水平;然而TNF-α的mRNA表达水平在各组间没有显著差异;VEGF、VEGFR1、VEGFR2的mRNA表达水平在碱烧伤中显著高于正常角膜中,在DPI组以及APO组中可以显著地降低。ROS的含量检测显示,碱烧伤后ROS的含量显著增加,DPI以及Apo可以显著地减少ROS的含量。心脏灌注荧光素钠角膜铺片结果显示:碱烧伤后角膜新生血管的面积显著高于正常组,DPI以及Apo可以显著减少角膜新生血管的面积。结论:在角膜碱烧伤中NADPH氧化酶明显升高。抑制NADPH氧化酶可以减缓碱烧伤对角膜的伤害,这可能为治疗角膜碱烧伤提供一个新的靶点。
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