Importin 13与Arx相互作用的研究

来源 :厦门大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangshuang_1975
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生物大分子的核质转运是由受体importinβ蛋白家族成员介导完成的。importin13(imp13,或者lgl2、IPO13)是importinβ蛋白家族的一个成员,它的表达和功能是受发育调节。Northern Blot和免疫组化实验均表明IPO13在脑的表达水平比其他组织都高。imp13是目前所知的哺乳动物细胞中唯一具有双向转运功能的受体蛋白。 本研究用羧基末端imp13(aminoacid307-963)(C-imp13)作为诱饵蛋白,用酵母双杂交系统筛选人胚胎脑cDNA文库中能够与其相互作用的蛋白,发现Arx蛋白质能与羧基末端imp13相互作用。为了确定这个相互作用,我们构建了能表达带有GST和His6标签的全长Arx的原核表达质粒。通过GST pull-down和免疫共沉淀实验,我们发现,像C端Arx与imp13相互作用一样,全长Arx也能与imp13(外源和内源)相互作用。由于imp13能够与Arx相互作用,我们推测Arx有可能是imp13的入核底物。Arx(Aristaless-related homeobox)蛋白是成对同源结构域蛋白家族的一个成员。ARX基因的突变和多种X-连锁的疾病有关。研究发现Arx对前脑,胰腺和睾丸的发育起重要作用。为了进一步研究Arx蛋白的功能,我们构建了表达Arx-GST融合蛋白质的表达载体pGEX4T2-F-Arx。F-rx蛋白纯化后做抗原,免疫兔子,血清经纯化和验证后,获得了Arx多克隆抗体。
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