当归—白芍药对配伍效应与物质基础研究

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一、文献研究对古今相关文献进行整理,较系统地综述了当归-白芍药对药用历史及现代研究进展。二、当归-白芍药对配伍化学特征研究采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术及主成分分析的数据处理方法,研究当归-白芍药对合煎液与合并液的差异性,在缺少对照品的情况下鉴定该药对中主要成分,探讨配伍对当归-白芍药对配伍前后主要活性成分的变化规律。通过对照品比对及MS分析,确认了当归-白芍药对中6个酚酸类成分、7个芍药苷类成分及2个苯酞类成分。由OPLS-DA分析结果得出,当归-白芍药对合煎液组和单煎合并液组明显分为两组,说明两者有成分有差别。经对照品及MS指认,儿茶素、咖啡酸、没食子酸、芍药苷和苯甲酰基芍药苷为当归、白芍单煎合并液与合煎液最大差异性成分,体现在各成分的相对量的变化。当归-白芍药对配伍合煎后儿茶素、咖啡酸、苯甲酰芍药苷等成分溶出增加,没食子酸及芍药苷溶出减少。配伍后未检测到新的成分。三、当归-白芍药对配伍效应与机理研究(一)当归-白芍药对配伍补血效应研究基于当归-白芍药对偏于补血的基础,建立环磷酰胺与乙酰苯肼合用诱导血虚小鼠模型以考察不同配比条件下当归-白芍药对补血效应特点。采用基线等比递增法设计当归-白芍配伍比例(1:0、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5、0:1),通过测定小鼠外周血象、免疫器官指数及红细胞膜能量酶活力,从器官组织及细胞分子等水平探讨当归-白芍药对补血效应,并利用主成分分析法对上述多指标进行主成分分析。主成分分析结果显示当归-白芍药对配伍比例在1:3-3:1范围内更接近正常组,补血效果较强,补血效应强于单味药。(二)基于代谢组学的当归-白芍药对补血效应机理研究采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术及基于模式识别的数据处理方法,研究当归-白芍药对对血虚模型小鼠内源性代谢产物的影响。结果发现苯丙氨酸、色氨酸、胆酸、溶血磷脂酰胆碱等10个内源性成分可能为血虚模型标志物。同时通过IPA通路分析,发现当归-白芍药对主要通过调节血虚小鼠氨基酸代谢、能量代谢及脂质代谢达到补血作用。四、当归-白芍药对配伍体内过程研究(一)当归-白芍药对在正常大鼠体内吸收研究本实验选取阿魏酸、咖啡酸、香草酸、藁本内酯、芍药苷、芍药内酯苷及氧化芍药苷为检测指标,采用UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中以上七种成分含量,并将其应用于大鼠灌胃当归、白芍单昧药提取物及当归-白芍药对提取物后相应成分的药动学比较研究。结果显示阿魏酸、咖啡酸和香草酸等酚酸类成分及藁苯内酯在当归组及当归-白芍药对组中药动学特征各异,当归与白芍合用后降低了阿魏酸与咖啡酸的吸收程度;延缓了香草酸在体内的消除;促进藁苯内酯在体内的消除。同时,当归、白芍合用后提高了芍药苷、芍药内酯苷及氧化芍药苷三种单萜苷类成分的吸收速率。(二)当归-白芍药对在正常大鼠体内分布研究本实验选取阿魏酸、香草酸、芍药苷、芍药内酯苷及氧化芍药苷为检测指标,采用UPLC-Q-TOF/MS检测并用TargetLynx软件进行分析,比较当归、白芍配伍前后以上成分在大鼠体内组织分布差异,从而探讨配伍对各成分组织分布的影响。结果显示阿魏酸和香草酸在大鼠体内主要分布于肾脏和肝脏,当归-白芍药对组与当归组比较,5 min时阿魏酸在大鼠心、肝、肺及肾脏的分布量显著增加;香草酸于5 min及60 min时在大鼠肝、肺及肾脏中分布量显著增加。芍药苷、芍药内酯苷及氧化芍药苷三种单萜苷类成分,主要分布在肝脏、肺、肾脏中,当归-白芍合用后显著减少了给药20 min后以上三种成分在大鼠肝脏和肾脏的分布。综上,当归、白芍配伍后可促进当归中有效成分的分布。(三)当归-白芍药对在正常大鼠体内代谢研究采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术及MetaboLynx软件和质量亏损过滤分析(MDF),共鉴定出当归-白芍药对中8个阿魏酸代谢产物:原型、硫酸酯结合产物、葡萄糖醛酸结合产物、牛磺酸结合产物、甲基化产物、二次甲基化产物、一次还原产物及去羰基化产物。共鉴定出4个香草酸代谢产物:原型、硫酸酯结合产物、二次甲基化产物及去甲氧基化产物。硫酸酯结合产物为阿魏酸和香草酸在体内的主要代谢产物,主要在存在于尿液中。与单味药当归比较,当归-白芍药对中阿魏酸及香草酸各代谢产物相对量均显著低于单味药。芍药苷及芍药内酯苷代谢大鼠体内主要以原型形式存在,经粪便排出,此外,还发生硫酸化及羟化甲基化反应,主要经粪便排出。与单味药白芍比较,当归-白芍药对中芍药苷及芍药内酯苷原型及代谢产物相对量均显著低白芍组。
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