论文部分内容阅读
目的:探讨从人新鲜口腔鳞癌组织中培养鳞癌细胞的方法以及应用免疫磁珠和流式细胞分离技术分离与鉴定口腔鳞癌干细胞的方法。方法:1.取自广西医科大学附属口腔医院2016-2017年行口腔鳞状细胞癌切除术的患者新鲜肿瘤标本6例,经抗污染处理,应用机械法获得原代口腔鳞癌细胞并用酶消化法传代。2.应用细胞形态学及免疫组化角蛋白抗体染色方法对原代鳞癌细胞进行鉴定。3.流式细胞仪检测原代鳞癌细胞中CD133、CD44的表达情况并用免疫磁珠法分选出相应CD133~+、CD44+细胞,并鉴定其分选效果。4.流式细胞仪检测分选前后细胞的细胞周期测定。5.将口腔鳞癌细胞及其分选出的亚群细胞进行成骨、成脂细胞诱导分化。6.将原代培养的肿瘤细胞及分选出的CD133~+、CD44+细胞亚群培养注射入裸鼠体内,进行体内成瘤实验,观察其成瘤情况。7.将移植瘤组织行HE染色,观察其组织病理改变。结果:1.成功培养出纯化的口腔鳞癌细胞,并能成功传代。2.通过细胞形态学能够体现口腔鳞癌细胞的生物学特点,角蛋白在OSCC胞浆中见棕色染色呈阳性。3.流式细胞检测鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD133的平均表达率为0.41%、CD44的平均表达率为33.76%。4.通过免疫磁珠法分选出的CD44+细胞、CD133~+细胞经流式细胞检测纯度均在94%以上,细胞周期检测处于G0/G1期。5.成功将口腔鳞癌细胞、CD44+细胞、CD133~+细胞诱导分化成成骨细胞及成脂细胞。6.皮下注射后第3天可在裸鼠接种区域触及新生肿物,CD133~+细胞组瘤体体积最大,CD44+细胞组次之,未分选口腔鳞癌细胞组最小,成瘤组织HE染色中,皆明显可见大量癌组织,其恶性程度由高到低依次为CD133~+细胞组、CD44+细胞、未分选口腔鳞癌细胞。结论:从人新鲜口腔鳞癌标本中利用机械法可成功获得大量原代口腔鳞癌细胞并能顺利传代,口腔鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD44表达偏高,CD133的表达量明显偏低。通过免疫磁珠法可以成功分选出高纯度的CD133~+细胞、CD44+细胞,是一群长期处于细胞周期的G0/G1期,高成瘤性的细胞,口腔鳞癌细胞、CD44细胞、CD133细胞不仅具有分化成成骨、成脂细胞的能力,且CD133细胞分化能力强于CD44细胞强于口腔鳞癌细胞;CD133~+细胞不仅成瘤性要强于CD44+细胞组,而且其移植瘤的恶性程度要高于CD44+细胞组,具有更强的干细胞特性。