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目的:研究湖北十堰地区2010年度医院感染多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株的β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、消毒剂与磺胺类耐药基因的分布规律，揭示铜绿假单胞菌的耐药机制。指导临床合理使用抗菌药物，为减少耐药菌株的流行及传播奠定基础。 方法:收集湖北医药学院附属太和医院2010年度50株医院感染多重耐药铜绿假单胞菌，K-B法检测临床常用抗菌药物的药敏结果，用琼脂稀释法测定医院常用消毒剂苯扎溴铵的最低抑菌浓度(MIC)，并分别用标准纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、改良三维试验检测AmpC酶（AmpC）、非金属碳青霉烯酶（KPC）、金属酶（MBLS）等耐药表型。用聚合酶链反应（PCR)检测其β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、消毒剂与磺胺耐药基因qacE△1-sul1。通过基因测序分析基因序列，揭示耐药基因亚型分布。用多个分子标志分型法，以25种耐药基因为分子标志作检测结果的样本聚类分析，检测菌株的亲缘性。 结果:50株医院感染多重耐药铜绿假单胞菌检出不同的β-内酰胺酶耐药表型，其中26株检出ESBLS，11株检出AmpC酶，34株检出MBLS，未检出KPC酶。通过PCR及基因测序检出：bla TEM-1基因10株、阳性率为20.0％，bla SHV基因5株、阳性率10.0%，bla OXA-10基因6株、阳性率12.0%，bla CARB-2基因11株、阳性率22.0%，bla IMP基因35株、阳性率70.0%，bla DHA基因3株、阳性率26.0%；未检出bla OXA-1群、bla OXA-2群、bla PER、bla VEB、bla GES、bla VIM、bla SPM、bla GIM、bla KPC基因；oprD2基因阳性率为30.0%。对临床常用四种氨基糖苷类抗菌药物（庆大霉素、奈替米星、阿米卡星、妥布霉素）的耐药表型不同，其中80%的菌株对四种氨基糖苷类抗菌药物均耐药，氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因检测结果：aac(6’)-I基因5株、阳性率10.0%，aac(6’)-II基因32株、阳性率64.0%，ant(3″)-I基因11株、阳性率22.0%，ant(2″)-I基因24株、阳性率48%；未检出aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ四种AMEs基因。对医院常用消毒剂苯扎溴铵的MIC在8～32ug/ml之间，高于对照菌ATCC27853的MIC值（t检验，t=17.25，P＜0.01，有统计学意义）；消毒剂与磺胺耐药相关基因qacE△1-sul1通过PCR检测及基因测序结果其阳性率为100%。聚类分析提示50株细菌之间有一定的亲缘关系。 结论: 1、2010年度50株医院感染多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药与携带bla TEM、bla SHV、bla OXA-10群、bla CARB、bla IMP、bla DHA等基因以及膜孔蛋白基因oprD2缺失有关。基因序列分析分别为TEM-1、OXA-10、CARB-2亚型。 2、50株医院感染多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药情况严重；氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因检测结果提示：湖北十堰市太和医院医院感染多重耐药铜绿假单胞菌以携带aac(6’)-II和ant(2″)-I基因为主。 3、50株医院感染多重耐药铜绿假单胞菌对医院常用消毒剂苯扎溴铵表现为耐药；细菌携带消毒剂与磺胺类药物耐药相关基因(qacE△1-sul1)是其对消毒剂、灭菌剂耐药的主要因素。 4、同源性分析结果提示：2010年度湖北医药学院附属太和医院多重耐药铜绿假单胞菌存在院内感染传播。