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研究背景及目的:目前射频消融已成为肝脏原发性和转移性肝癌有效治疗方法之一。射频消融治疗主要是利用高频交流电流(350-500KHz)使细胞组织内离子产生震荡摩擦生热,导致细胞损伤坏死。当温度超过60℃会使细胞内蛋白质和脂质双分子层变性,从而导致细胞不可逆性死亡。当在较低温度下(50℃～55℃),射频治疗4～6 d可造成细胞不可逆的损伤。因此有必要对不同温度控制条件下肝癌射频消融后残瘤细胞活性变化规律进一步研究。 本实验通过对不同温度控制条件下射频消融兔肝VX2肿瘤后靶区内肿瘤细胞凋亡、增殖变化情况,探讨不同温控条件下射频消融对恶性肿瘤组织细胞活性的影响情况,为肝恶性肿瘤射频消融治疗提供实验依据。 材料与方法:对健康新西兰大白兔行开腹肝左叶种植VX2瘤株,建立兔VX2肝肿瘤模型。对照组6只,实验组72只,在兔接种VX2瘤株14 d后行肝脏CT平扫及双期增强扫描,以确定VX2瘤株接种是否成功。3 w后肿瘤直径约2.0～2.5 cm,将对照组6只处死,取肝内肿瘤组织行病理检查。实验组中分为三组(n=24)。每组皆在开腹下行射频消融术。第一组条件:射频针温度50℃～70℃,射频电压48 v,治疗时间15 min。第二组条件:射频针温度70℃～90℃,射频电压48 v,治疗时间15 min。第三组条件:射频针温度90℃～110℃,射频电压48 v,治疗时间15 min。术后即刻、1 d、3 d、1 w、2 w、3 w,共6个时间段处死(n=6)。将残瘤大体标本分为:针道炭化区、热凝固区、充血出血区(消融边界区),三区标本分别置入10％福尔马林浸泡,然后脱水、烘干、石蜡包埋,行HE染色、tunel、PCNA免疫组化检测。术中观察腹腔内、肺转移情况。分析瘤体经过不同温度RFA治疗后,不同区带内肿瘤细胞活性变化特点。 结果: 1.本组实验中78只新西兰兔,肝内接种成功77只(成瘤率98.7%),肿瘤病灶直径约2.0～2.5 cm;2只分别在种植后第7、10 d死亡,发现腹腔转移灶2只。接种未成功的和死亡的予以补种。 2.HE染色:针道碳化区:三组标本(50℃～110℃)光镜下见大量肿瘤细胞结构消失,胞核固缩、核碎裂、部分肿瘤细胞溶解液化。热凝固区:(1)50℃～70℃组:1 w后见较多存活的肿瘤细胞和炎性细胞;3 w后见到大量存活的肿瘤细胞。(2)第二、三组(70℃～110℃):1～3 d后见到大量凝固坏死细胞和少量坏死细胞;1 w后,热凝固区逐渐变成白色并与周围区域分界欠清,炎性细胞浸润明显;3 w后可见部分存活肿瘤细胞。充血出血区:(1)50℃～70℃组:2 w后见交界区内较多的肿瘤细胞,其形态及分布较规则,细胞轻度水肿,肝窦间隙见大量红细胞;3 w后可见大量肿瘤细胞。(2)第二、三组(70℃～110℃):2 w后见少许肿瘤细胞存在并见少量纤维增生;3 w后可见较多肿瘤细胞。 3.RFA术后兔VX2肝肿瘤凋亡的TUNEL法检测结果:(1)50℃～70℃组凋亡指数(AI):针道区为0.22±0.19,热消融区为0.38±0.17,交界区为0.39±0.11;(2)70℃～90℃组AI:针道区为0.28±0.09,热消融区为0.54±0.07,交界区为0.59±0.10;(3)90℃～110℃组AI:针道区为0.30±0.07,热消融区为0.60±0.17,交界区为0.61±0.12;与对照组(AI:0.05±0.07)比较有明显意义(P<0.05)。三组针道区6个时间点相比较无明显差异(P>0.05)。第二、三组热消融凝固区和充血出血区(交界区)凋亡指数相比较(P>0.05)无明显差异,第一组和二、三组热消融凝固区和充血出血区(交界区)凋亡指数相比较在术后即刻、1 d、3 d相比较(P<0.05)有差异,在1 w和3 w相比较(P>0.05)无明显差异。和对照组比较(P﹤0.05)有统计学愿意。 4.RFA术后兔VX2肝肿瘤增殖的PCNA检测结果:第一组(针道区、热消融区、充血出血区)各区域在不同时间点增值指数(PI)与对照组(PI:0.20±0.29)比较(P<0.05)有明显统计学意义。其针道炭化区在即刻、1 d后PI无较大变化;热凝固区在2 w后PI指数恢复到术前对照水平;充血出血区在2 w时PI明显升高,PI与术前对照组相比(P>0.05)无明显差别。第二、三组三区带(针道区、热消融凝固区、充血出血区)内各区域在不同时间点增值指数(PI)与术前对照组比较(P<0.05)有明显统计学意义。其中针道炭化区在即刻、1 d后PI数值无较大变化;热凝固区在3w后PI指数恢复到术前对照水平;交界区在1 w时PI升高,在2 w时PI明显升高(P<0.05),但仍低于对照组,在3 w后PI则高于对照组。各区域之间PI比较在2w后有明显差别。 结论: 1.兔VX2肝肿瘤模型改良法具有复制简单、成功率高、成瘤周期短等的特点,可较好地应用于肝癌射频消融的实验研究。 2.射频消融温度在50℃～110℃范围内对兔VX2肝肿瘤针道区内肿瘤细胞基本能达到灭活作用; 3.射频消融温度在50℃～70℃范围内,兔VX2肝肿瘤的边界区在2w后仍出现增值能力增加的现象;在70℃～90℃范围内3 w后交界区残留组织细胞增殖能力仍可以恢复到术前状态;90℃～110℃范围内3 w后交界区残留组织细胞增殖能力增加但仍低于术前状态; RFA治疗过程中应将温度保持在90℃～110℃范围内,尽量一次对肿瘤实行彻底的消融治疗,治疗中可采用多点穿刺以加大消融范围,同时缩短再次治疗的时间间隔或联合其他治疗方法。