【摘 要】
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目的在核酸和蛋白质水平,检测不同浓度牛膝多糖诱导单核细胞HLA-DRα的表达,研究牛膝多糖(ABPS)在体外对单核细胞的激活作用.方法采集健康成人的血液,肝素抗凝,用淋巴细胞分
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目的在核酸和蛋白质水平,检测不同浓度牛膝多糖诱导单核细胞HLA-DRα的表达,研究牛膝多糖(ABPS)在体外对单核细胞的激活作用.方法采集健康成人的血液,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用贴壁法分离单核细胞,转移细胞到24孔板在同一时间不同ABPS浓度或同一浓度不同时间、37℃、5﹪CO<,2>培养.(1)用流式细胞术(CD14)鉴定单核细胞.(2)细胞的激活作用由中性红实验和电镜检测.(3)RT-PCR检测HLA-DR的核酸表达水平:用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取单个核细胞总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用HLA-DR<,α>引物进行热启动PCR扩增.用Premier 5.0软件设计HLA-DR<,α>引物.上游引物和下游引物分别进行BLAST,参照NM_019111.2,产物为635bp.产物经过测序后BLAST,比较PCR产物的同源性.(4)购买荧光标记抗HLA-DR<,α>抗体,用流式细胞术检测HLA-DR<,α>蛋白表达.结论在体外,ABPS诱导单核细胞表达HLA-DR<,α>,有显著的剂量和时间效应,并能激活单核细胞.
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