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前言 骨肉瘤目前认为是最常见的恶性骨肿瘤，恶性度高、预后差。目前其发生发展的过程尚不清楚。研究表明端粒酶调控系统与一些恶性肿瘤的发生有关，但其与骨肉瘤的关系尚属未知。本文采用免疫组化法对端粒酶调控系统中的端粒酶催化亚单位(hTERT)和癌基因c-myc在骨肉瘤中的表达进行检测，探讨两者与骨肉瘤发生的关系。 实验材料与方法 一、材料 收集中国医科大学基础医学院病理教研室石蜡标本，骨肉瘤78例，骨软骨瘤18例，其中骨肉瘤为实验组，骨软骨瘤为对照组。石蜡标本制成5μm厚的切片，每例免疫组化染色前均经2-3名病理医生确诊。 二、方法 1 采用链霉素抗生物素--过氧化物霉法(S-P)进行免疫组织化学染色，第一抗体分别为兔抗人hTERT多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)和鼠抗c-myc单克隆抗体(美国Maxim公司)。 染色步骤简单依次为：脱蜡和水化，过氧化物酶阻断溶液的孵育；酶溶化法抗原修复；非免疫性动物血清孵育；链亲和素-过氧化物酶溶液孵育；DAB溶液显色；苏木素复染，中性树胶封片。各步之间用PBS(PH7.4)冲洗。以PBS置换等一抗体作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。 二以细胞核或细胞浆呈棕黄色为阳性，在显微（荧光）图像分析系统下，每例选取6－8个具有代表性的高倍视野，得出平均灰度值。根据每个视野的平均灰度值计算出每例的平均灰度值。以每例平均灰度值反应表达强度，值愈小，强度愈高，反之亦然。骨肉瘤、骨软骨瘤的hTERT和C－myC蛋白平均灰度值间相关性分析采用SPSS10．0统计软件进行t检查和Pearson相关分析。 结 果 骨肉瘤中hTERT阳性表达在细胞核和细胞浆中，C－p C蛋白阳性表达也在细胞核和细胞浆中。骨软骨瘤中hTERT阳性表达在软骨细胞核中，c－myc蛋白也在细胞核中表达。骨肉瘤、骨软骨瘤中nrsar和c－myc蛋白平均值见下表。经统计学检验在骨肉瘤、骨软骨瘤间hThRT和c－myc蛋白平均灰度值比较均有非常显著性差异（P＜0．of入这说明在骨肉瘤中 hTERT和 C－myC蛋白表达强度均高于骨软骨瘤。经相关性分析，骨肉瘤中hTERT和 C－myC蛋白平均灰度值无相关性乃＞0．05人 表 两种肿瘤 hThRT和 c－myc蛋白平均发度值比较（二。S） 指标 骨肉瘤 骨软骨瘤 HTERT 99．954．17 108．98土3．57 c—myc 98．61 t3．48 110．03土3．84 P＜0．of 讨 论 人的端粒酶活性首先在Hela细胞中发现，此后研究者应用同 ·2· 位素标记检测端粒重复序列延伸法发现卵巢癌、恶性血液病及骨 巨细胞瘤中也有端粒酶活性存在。Kim等采用端粒重复片段扩增 法首次进行了大样本的端粒酶活性检测研究。结果表明94个永 生化细胞系皆为阳性，101例恶性肿瘤活检组织中90例呈阳性， 此后相继的研究表明大多数的恶性肿瘤有端粒酶活性表达，而且 其活性与肿瘤的恶性程度和预后相关。因此，目前普遍认为端粒 酶与肿瘤的发生及发展密切相关。 对端粒酶调控系统的研究进一步阐明了其活化机理。两种分 别来自酵母和游扑虫瘤的端粒酶相关蛋白EStZp，P123被确定为 各自物种的端粒酶催化亚单位。随后人类端粒酶催化亚单位基因 的CDNA也被克隆出来，被命名为hTERT，它是端粒酶活性限制性 因子。Wu等将hTERT启动子基因进行了克隆，证明启动子上存 在2个C－myC结合位点，hTERT是C－myC的直接转录靶器官， 即C一回VC可直接激活hThRT而使端粒酶活性提高。因此，C－ mvc和hTERT作为端粒酶活性的调控因子在肿瘤的发生中起重 要作用。 J 结 目前有关hTERT在肿瘤中的表达和端粒酶活性关系的研究 已有一些报道。研究表明肾癌、子宫内膜癌在巢癌、肝癌、子宫颈 癌、结肠癌等肿瘤hTERT均呈高表达，且与端粒酶活性具有密切 相关。本研究显示在骨肉瘤中hhRT也呈高表达，说明其参与了 骨肉瘤的发生过程。另外，ParadiS等在肾癌的研究中证明C－myC 和hTERT表达水平并不相关，本研究也同样证明了两者无相关 性，这可能说明在骨肉瘤发生中的hTERT和C－myC是两个独立 的事件。 ·3· 结 论 1．端粒酶催化亚单位上一p C蛋白分别与骨肉瘤的发生密切相关。 2．端粒酶催化亚单位和c－myc蛋白在骨肉瘤的表达无相关性。