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目的：探讨TIG3在原发性肝细胞癌的表达及其作用的机制 方法： 1、临床组织标本上，通过免疫组织化学检测42对肝癌石蜡标本及癌旁正常肝组织标本中TIG3、Ki-67的表达情况，然后统计学分析两者蛋白表达有无相关性。 2、在体外细胞水平，通过实时定量 PCR检测在正常肝细胞和肝癌细胞的TIG3表达情况。 3、将全长TIG3cDNA序列克隆到GV141过表达载体上，构建过表达TIG3基因重组质粒，并通过PCR及测序验证，然后再进行扩增和提取。 4、在TIG3内在表达水平最低的细胞，利用脂质体2000瞬时转染TIG3过表达重组质粒，转染后定量PCR评估转染效果。 5、MTT比色法及平板克隆实验检测过表达TIG3对肝癌细胞活力及增殖的影响。 6、流式细胞仪检测过表达TIG3与肝癌细胞增殖周期的关系。 7、Transwell分析过表达TIG3对肝癌细胞迁移的作用。 8、采用共聚焦免疫荧光技术探讨过表达TIG3对肝癌细胞凋亡的作用。 9、Western blot检测过表达TIG3对细胞中ERK1/2，p-ERK1/2，Caspase3，Cleave Caspase3,Bax分子表达量的影响,推测TIG3分子参与的信号传导通路。 10、在体内裸鼠水平，肝癌细胞转染后采用G418维持筛选获得稳定转染TIG3肝癌细胞株，然后接种于5-6周雌性裸鼠皮下，每周测量其形成瘤体大小，绘制生长曲线，4周后杀死裸鼠，取裸鼠皮下瘤体再次测量其体积及重量。 结果： 1、在临床标本中，与邻近的非癌性肝组织相比，TIG3在肝癌组织中低表达（阳性率为19.05％ VS76.19%,P<0.001）。相反，Ki-67呈高表达（阳性率为61.9%VS11.9%,P<0.001）。同时，在肝癌组织中TIG3和Ki-67蛋白的表达呈显著负相关。 2、在体外细胞水平上，相对于原代肝细胞和正常肝细胞，TIG3在肝癌细胞中的低表达，尤其在Hep3B肝癌细胞中其表达量最低。 3、重组过表达TIG3构建成功，质粒PCR及测序验证无误。 4、转染过表达TIG3后，定量PCR分析显示TIG3的mRNA表达量增加约4倍,过表达TIG3质粒成功转入Hep3B肝癌细胞中。 5、MTT比色法检测出过表达TIG3可抑制肝癌细胞活力,同时平板克隆实验也显示过表达TIG3可抑制肝癌细胞克隆的形成，明显抑制Hep3B肝癌细胞生长增殖。 6、流式细胞仪检测结果表明，与阴性对照细胞相比，在 TIG3过表达的细胞中，S期细胞数量明显减少，G1期细胞数量显著增加，表明过表达TIG3抑制Hep3B肝癌细胞周期G1到S期的转换，阻断Hep3B肝癌细胞增殖。 7、Traswell分析发现转染过表达TIG3质粒的细胞，被结晶紫染色迁移的Hep3B肝癌细胞明显减少，这说明TIG3具有明显抑制Hep3B肝癌细胞迁移的作用。 8、共聚焦免疫荧光发现过表达TIG3可诱导活化caspase3，使其表达量增加，使 Hep3B肝癌细胞出现核固缩、核溶解，微丝集聚浓缩、形成微丝环等细胞凋亡现象的发生。 9、Western blot发现两组总ERK1/2蛋白无明显变化，但转染过表达TIG3质粒组p-ERK1/2明显减少，而Caspase3、Cleave Caspase3、Bax凋亡蛋白明显增加，差异均有统计学意义，也就是说过表达TIG3可抑制ERK信号途径的活化，促进Caspase3信号的活化，诱导Hep3B肝癌细胞发生凋亡。 10、在裸鼠，相对于空白对照组，转染过表达TIG3组，瘤体生长减缓,移植瘤体积、重量明显减小(P<0.05)。说明高TIG3表达后,该组裸鼠的肿瘤形成能力明显降低了,进一步说明过表达TIG3抑制Hep3B肝癌细胞增殖的作用。 结论： 1、TIG3在肝癌中低表达，可作为肝癌鉴别诊断分子生物学标志。 2、过表达TIG3可通过抑制ERK信号通路的活化，在体内外抑制肝癌细胞生长，可作为肝癌靶向治疗新的重要位点。