实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义的研究

• 作 者: 钱俊
• 出 处: 浙江大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 大肠癌 微转移 CEA CK-20 实时荧光定量RT-PCR

大肠癌为常见多发的消化道恶性肿瘤，随着生活水平的提高和饮食习惯的改变，大肠癌的人群患病率有所上升，并有年轻化趋向。大肠癌病人尽管接受了以手术为主的根治术，但临床上仍有50％的大肠癌患者死于术后的肿瘤局部复发和转移，成为手术治疗失败的主要原因。因此应用先进的分子生物学技术、建立定量荧光RT-PCR方法检测大肠癌肿瘤标志物、术后转移的早期诊断受到高度重视。本项研究应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞及探讨其临床意义。从2003年5月至2004年1月，收集在日本爱知癌症中心手术81例大肠癌病例，应用随机引物和寡核苷酸引物，检测大肠癌病人手术腹腔冲洗液中游离细胞的癌胚抗原(CEA)mRNA和细胞角蛋白20(CK-20)mRNA双重特异性标志物，并检测3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参因子。并在罗氏的实时荧光定量PCR(LightCycler)上进行定量分析。样本同时进行常规细胞学检查。所有病例术后经过平均为1年的随访。研究结果表明：CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率和值均与肿瘤的侵润度(T)，分期以及淋巴结转移相关。在一个合理界定值上，CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100％和100％，而常规的细胞学检查则为33％和100％。CEA或CK20的水平异常与大肠癌手术后无瘤生存率密切相关，通过实时荧光定量PCR方法，测定腹腔冲洗液中CEA和CK20的值，显示出高于常规细胞学检查的特异性和敏感性，是检测大肠癌腹腔微转移的有效方法。为临床治疗大肠癌分子水平的诊断、以及随后的对于具有高危因素病人的辅助化疗提供了一个新的策略。