论文部分内容阅读
β-葡聚糖是一种天然的或者通过发酵工艺制备的多糖，分子结构主要包含β-(1，3)连键和β-(1，6)连键，并且可能含有少量的α连键。它广泛存在于自然界的各种真菌（例如:灵芝，蘑菇，绣球菌）内部以及酵母菌的细胞结构中。其在实际生活以及生产领域的应用可以追溯到上世纪八十年代。现如今，它已经应用于食品、化妆品、保健品、医药、环境等领域。本实验室所制备的一种名为Salecan的β-葡聚糖已展现出了很多生物学活性，其可能具备的其他方面的生物学活性还有待进一步的研究和探讨。为了考察Salecan的免疫学活性以及对组织细胞基因表达的调节作用，本人以6周左右大C57BL6小鼠为实验模型，通过化疗药物环磷酰胺(200mg/kg或者300mg/kg，i.p)影响小鼠免疫相关指标（例如:白细胞数量、淋巴细胞数量、红细胞数量、脾脏指数等）和免疫、炎症、抗氧化相关基因（例如:IL-6、IL-1β、TNF-α、SOD、CATase等）表达量以及细胞信号通路中相关蛋白（Akt/蛋白激酶B）的磷酸化修饰作用，然后给予不同重复剂量的Salecan（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg），最后检测与统计免疫相关指标和组织细胞炎症、免疫、抗氧化相关基因表达量以及细胞内信号转导途径中蛋白激酶B的磷酸化水平的变化，探讨在环磷酰胺引起上述各项改变的情况下，Salecan对它们的调节作用。实验结果显示，化疗药物环磷酰胺（200mg/kg或者300mg/kg，i.p）会显著降低小鼠外周血液中白细胞、淋巴细胞、红细胞数量和脾脏指数（将白细胞数量降低到4.0×109/L左右，将淋巴细胞数量降低到2.0×109/L，将红细胞数量降低到7.5×1012/L左右，将脾脏指数降低到2.0(mg/kg)左右），引起组织细胞中IL-6、TNF-α、SOD基因表达水平上升和CATase、EPO基因表达水平下降，以及Akt的磷酸化水平的上升，在此情况下，重复剂量（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，i.p）的Salecan则能够在一定程度上恢复接受化疗药物环磷酰胺的小鼠外周血液中白细胞数量和脾脏指数（例如:重复剂量5mg/kg的Salecan能够将白细胞数量恢复至5.0×109/L左右，重复剂量10mg/kg和重复剂量20mg/kg的Salecan则基本上能够将白细胞数量恢复至正常;重复剂量5mg/kg的Salecan能够将脾脏指数恢复至2.7(mg/kg)左右，重复剂量10mg/kg的Salecan能够将脾脏指数恢复至3.0（mg/kg）左右，重复剂量20mg/kg的Salecan能够将脾脏指数恢复至正常），对红细胞数量没有明显影响。在环磷酰胺模型下，各种不同重复剂量的Salecan(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，i.p)均不会引起小鼠体重的明显降低或增加。在环磷酰胺对IL-1β、1L-6、TNF-α、CATase、SOD、EPO基因表达量产生影响的前提下，Salecan对上述基因表达量起一定的调节作用（具体而言，在环磷酰胺对组织细胞上述基因表达量产生调控作用的前提下，苯酚-氯仿提纯和碱法提纯的Salecan都能够提高IL-1β基因表达量，苯酚-氯仿提纯的Salecan降低IL-6基因表达量，提高EPO和CATase基因表达量，碱法提纯的Salecan降低TNF-α基因表达量）。Western印记实验显示，Salecan在环磷酰胺引起组织细胞蛋白激酶B的磷酸化水平上升的情况下降低了其磷酸化水平。 结果表明，在环磷酰胺引起白细胞、淋巴细胞、脾脏指数明显降低的情况下，Salecan能够有效恢复上述指标，并且在环磷酰胺引起组织细胞免疫、炎症、抗氧化相关基因表达量改变的情况下调节其表达量，在环磷酰胺引起组织细胞蛋白激酶B磷酸化水平上升的情况下降低磷酸化水平，这可能在今后的医学、保健等领域具有潜在的应用价值。